※ 引述《pelagic (忙阿~~~~~~)》之銘言： : 因為實驗室再研究一個protein : 但是因為沒有這一個protein的抗體 : 所以我們在這個protein的前端接了一段8個胺基酸的Flag : 再將接有Flag的protein送到細胞中 形成stable clone : 在抗體來之前都是使用Flag的抗體來抓此一protein : 效果也都不錯 : 但是現在問題來了 : 因為請外面公司訂做此一protein的抗體最近剛到 : 但是在細胞中卻什麼東西都抓不到 可能這抗體不能做ICC，原理很簡單...因為protein有立體的結構 通常廠商合成抗體只考慮到epitope是不是很unique.... 但常常這片段的氨基酸序列是埋再外面碰不到的立體結構內部 驗證這點最好也用你的細胞抽蛋白質做Western....再和你anti- flag比較看看是不是同一條band....如果是大概就沒錯 : 而再組織中卻有一條蠻明顯的band 而且接近該protein的分子量 : 在唯一band的附近也沒有其他雜band : 這使我們非常納悶 : 到底是抗體有問題 抓到組織中的band只是非特異性的 : 或是在哪些地方出了問題 : 麻煩解答一下 感激不盡 能做Western的抗體不見得可以做ICC，反之亦然.... 同樣in vivo and in vitro也不見得有相同結果.... 很多抗體可以做細胞，用在活體上就染不到東西 --

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