作者Mouseking (叫我老鼠王....-_-)
看板Biotech
标题Re: [问题] 抗体在细胞株跟组织的特异性
时间Tue Nov 14 23:54:38 2006
※ 引述《pelagic (忙阿~~~~~~)》之铭言：
: 因为实验室再研究一个protein
: 但是因为没有这一个protein的抗体
: 所以我们在这个protein的前端接了一段8个胺基酸的Flag
: 再将接有Flag的protein送到细胞中 形成stable clone
: 在抗体来之前都是使用Flag的抗体来抓此一protein
: 效果也都不错
: 但是现在问题来了
: 因为请外面公司订做此一protein的抗体最近刚到
: 但是在细胞中却什麽东西都抓不到
可能这抗体不能做ICC，原理很简单...因为protein有立体的结构
通常厂商合成抗体只考虑到epitope是不是很unique....
但常常这片段的氨基酸序列是埋再外面碰不到的立体结构内部
验证这点最好也用你的细胞抽蛋白质做Western....再和你anti-
flag比较看看是不是同一条band....如果是大概就没错
: 而再组织中却有一条蛮明显的band 而且接近该protein的分子量
: 在唯一band的附近也没有其他杂band
: 这使我们非常纳闷
: 到底是抗体有问题 抓到组织中的band只是非特异性的
: 或是在哪些地方出了问题
: 麻烦解答一下 感激不尽
能做Western的抗体不见得可以做ICC，反之亦然....
同样in vivo and in vitro也不见得有相同结果....
很多抗体可以做细胞，用在活体上就染不到东西
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 210.58.54.177
1F：推 pelagic:感谢M大 让我对抗体跟protein有进一步了解 11/15 00:12
2F：→ jbking:推三及结构及epitope问题 11/18 09:35