作者Mouseking (叫我老鼠王....-_-)
看板Biotech
標題Re: [求救] 有關gel extraction
時間Mon Nov 20 10:53:06 2006
※ 引述《jay0404 (yuga)》之銘言：
: 小弟目前再做一個subclone
: 所以要把目前clone的plasmid中的insert用限制酉每處理
: 在用gel extraction kit把它elute出來
: 我首先使用EcoRI去切分離出兩個片段
: vector(3k)+insert(~900bp)
: 在用BsaHI去處理第二刀Vector變兩個片段(~1200+~1800)
: insert變成(~750bp+~150bp)兩個片段
: 而我要的事~750bp的片段
: 跑膠後很高興的把它切下來
: 用Qiagen gel extraction kit去elute
: 但是........
: elute完的DNA去跑膠定量加check後
: 冏rz.....
: 它的片段跑到1000bp多了
: 做了好幾次都這樣
: 於是我不死心的把elute完的DNA去做限制酉每處理
: 用了EcoRI BsaHI EcoRI+BsaHI 三種切法
: 跑膠後發現都掉回我原本要的大小~750bp
還有一段250bp的嘛？如果沒有方便告知你elute的片段是合方神聖？
詳細序列？如gene code? 0000~0000?
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◆ From: 210.58.54.177
1F：推 jay0404:這個嗎..我做的是用Chip從印度山羌genomic DNA上 11/20 10:56
2F：推 jay0404:抓下來的片段，目前推測試150bp的小片段黏回去了 11/20 10:59
3F：→ jay0404:可是沒啥理由黏回去就是了，因為之前同一組kit 11/20 10:59
4F：→ jay0404:同樣的sample她有成功過只是那次做的subclone沒成功 11/20 11:00
5F：→ jay0404:所以才要再做一次卻又一直出現奇怪的情況 11/20 11:01