作者Mouseking (叫我老鼠王....-_-)
看板Biotech
标题Re: [求救] 有关gel extraction
时间Mon Nov 20 10:53:06 2006
※ 引述《jay0404 (yuga)》之铭言：
: 小弟目前再做一个subclone
: 所以要把目前clone的plasmid中的insert用限制酉每处理
: 在用gel extraction kit把它elute出来
: 我首先使用EcoRI去切分离出两个片段
: vector(3k)+insert(~900bp)
: 在用BsaHI去处理第二刀Vector变两个片段(~1200+~1800)
: insert变成(~750bp+~150bp)两个片段
: 而我要的事~750bp的片段
: 跑胶後很高兴的把它切下来
: 用Qiagen gel extraction kit去elute
: 但是........
: elute完的DNA去跑胶定量加check後
: 冏rz.....
: 它的片段跑到1000bp多了
: 做了好几次都这样
: 於是我不死心的把elute完的DNA去做限制酉每处理
: 用了EcoRI BsaHI EcoRI+BsaHI 三种切法
: 跑胶後发现都掉回我原本要的大小~750bp
还有一段250bp的嘛？如果没有方便告知你elute的片段是合方神圣？
详细序列？如gene code? 0000~0000?
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 210.58.54.177
1F：推 jay0404:这个吗..我做的是用Chip从印度山羌genomic DNA上 11/20 10:56
2F：推 jay0404:抓下来的片段，目前推测试150bp的小片段黏回去了 11/20 10:59
3F：→ jay0404:可是没啥理由黏回去就是了，因为之前同一组kit 11/20 10:59
4F：→ jay0404:同样的sample她有成功过只是那次做的subclone没成功 11/20 11:00
5F：→ jay0404:所以才要再做一次却又一直出现奇怪的情况 11/20 11:01