作者snowtree (blue eyes blue)
看板Biotech
標題Re: [問題] 關於Inclusion Body的純化
時間Wed Dec 6 16:26:01 2006
※ 引述《ROKEE (可不可以不要再胖下去啦~)》之銘言：
: ※ 引述《brigand (台灣加油)》之銘言：
: : 我的蛋白質已經不可能形成Native Form
: : 所以純化Inclusion Body是我唯一的選擇
: : 我的Protein 是 GST-fusion protein
: : 是使用 Glutathione Sepharose 來結合然後沖提出來
: : 想請問板上的大大們
: : 如果我的Inclusion Body是溶在 PBS + 8M urea + 10mM PMSF 的環境下
: : Glutathione Sepharose 的 binding 能作用嗎?
: : PMSF 跟 Urea 是否會影響 binding 呢?
: 基本上 GST 是和 Glutathione Sepharose (以下簡稱resin)
: 上的 10 個 C 原子結合，藉此和其它 crude 分開
: 如果你的蛋白這麼「頑劣」，甚至接在 GST 後面還不可溶的話
: 那麼上述的這套方法並不適合你使用
: 因為你的 system 含有 urea，換句話說，連 GST-tag 都被 denature
: 那 resin 要認什麼?
如果po 的protein 是his-tag 的 是沒問題
用denature bfr 處理後 使inclusion body 回溶
在去純化 跑sds 是可以看到protein的
GST-tag 的話 就不太行了 純化後蛋白的量一定很少很少
甚至純化不出來 而且你接下來的實驗
如果是需要native的蛋白 那如何去refolding
又是一個問題
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.131.122
1F：推 ROKEE:他都已經說要用GSH resin純化了,哪又有扯到His-tag?? 12/06 17:13
2F：→ ROKEE:又，SDS-PAGE就SDS-PAGE，什麼叫做"跑sds"??? 12/06 17:14
3F：推 snowtree:你推文有必要這麼無禮嗎 我只是提出我的看法 在兩種不同ꨠ 12/07 15:10
4F：→ snowtree:情況下 會有怎樣的結果 跑SDS-PAGE 我打成跑sds 괠 12/07 15:15
5F：→ snowtree:可以讓你這麼憤世疾俗嗎 學習怎麼去尊重別人吧你 12/07 15:17
6F：推 ROKEE:抱歉我的用詞讓你誤會我的意思 12/07 19:45
7F：→ ROKEE:但是科學不就該是用精確的用詞嗎?寫那種跟注音文差不多的.. 12/07 19:46
8F：→ ROKEE:字句很容易讓跟入門的新手誤解 12/07 19:47