作者snowtree (blue eyes blue)
看板Biotech
标题Re: [问题] 关於Inclusion Body的纯化
时间Wed Dec 6 16:26:01 2006
※ 引述《ROKEE (可不可以不要再胖下去啦~)》之铭言：
: ※ 引述《brigand (台湾加油)》之铭言：
: : 我的蛋白质已经不可能形成Native Form
: : 所以纯化Inclusion Body是我唯一的选择
: : 我的Protein 是 GST-fusion protein
: : 是使用 Glutathione Sepharose 来结合然後冲提出来
: : 想请问板上的大大们
: : 如果我的Inclusion Body是溶在 PBS + 8M urea + 10mM PMSF 的环境下
: : Glutathione Sepharose 的 binding 能作用吗?
: : PMSF 跟 Urea 是否会影响 binding 呢?
: 基本上 GST 是和 Glutathione Sepharose (以下简称resin)
: 上的 10 个 C 原子结合，藉此和其它 crude 分开
: 如果你的蛋白这麽「顽劣」，甚至接在 GST 後面还不可溶的话
: 那麽上述的这套方法并不适合你使用
: 因为你的 system 含有 urea，换句话说，连 GST-tag 都被 denature
: 那 resin 要认什麽?
如果po 的protein 是his-tag 的 是没问题
用denature bfr 处理後 使inclusion body 回溶
在去纯化 跑sds 是可以看到protein的
GST-tag 的话 就不太行了 纯化後蛋白的量一定很少很少
甚至纯化不出来 而且你接下来的实验
如果是需要native的蛋白 那如何去refolding
又是一个问题
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.131.122
1F：推 ROKEE:他都已经说要用GSH resin纯化了,哪又有扯到His-tag?? 12/06 17:13
2F：→ ROKEE:又，SDS-PAGE就SDS-PAGE，什麽叫做"跑sds"??? 12/06 17:14
3F：推 snowtree:你推文有必要这麽无礼吗 我只是提出我的看法 在两种不同ꨠ 12/07 15:10
4F：→ snowtree:情况下 会有怎样的结果 跑SDS-PAGE 我打成跑sds 괠 12/07 15:15
5F：→ snowtree:可以让你这麽愤世疾俗吗 学习怎麽去尊重别人吧你 12/07 15:17
6F：推 ROKEE:抱歉我的用词让你误会我的意思 12/07 19:45
7F：→ ROKEE:但是科学不就该是用精确的用词吗?写那种跟注音文差不多的.. 12/07 19:46
8F：→ ROKEE:字句很容易让跟入门的新手误解 12/07 19:47