作者anchi35 ( )
看板Biotech
標題[求救] flag-tagged protein expression
時間Sat Jan 26 14:26:03 2008
請問各位高手
目前在進行flag-tagged protein的實驗
實驗大致如下
質體以superfect送入到PC3 cell 養overnight
將細胞lyse後15000rpm 離心20min 取上清液
Control組 : PC3 cell lysate only
實驗組 : Flag-tagged protein 1 75kDa (我主要在測試的)
Flag-tagged protein 2 20kDa (實驗室學姊的,這組算是用來測試transfection
是否成功)
做western
用的抗體是Sigma Monoclonal ANTI-FLAG M2 monoclone antibody 1:500
結果出現一些雜band (control組也有)
protein 2有大量表現
protein 1則沒有
可是比較3組 扣除都有出現的雜band
Flag-tagged protein 1那組有多出兩條約40-50kDa大小的band
請問這有可能是protein 1 degrade?
還是也只是雜band 而我要的protein 1根本不表現
如果是根本不表現 請問可能原因為何?
該如何使它表現?
謝謝各位的回答及指教
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 61.231.125.157
1F：推 bluecsky:antibody會不會用太多?1:500耶..太多的話雜band也會多阿 01/27 12:27
2F：→ bluecsky:這種訂來的量跟純度都夠..不需要這麼多吧 01/27 12:28
3F：推 soom:sigma M2 我也有在用，1:2000都還ok 我也建議稀釋 01/27 15:27
4F：推 leoblack:sigma M2我們家用到1:10000(1萬,沒錯!!)都還認得到耶~ 03/03 12:04
5F：→ leoblack:1:500會不會太濃了啊?! 03/03 12:05