作者anchi35 ( )
看板Biotech
标题[求救] flag-tagged protein expression
时间Sat Jan 26 14:26:03 2008
请问各位高手
目前在进行flag-tagged protein的实验
实验大致如下
质体以superfect送入到PC3 cell 养overnight
将细胞lyse後15000rpm 离心20min 取上清液
Control组 : PC3 cell lysate only
实验组 : Flag-tagged protein 1 75kDa (我主要在测试的)
Flag-tagged protein 2 20kDa (实验室学姊的,这组算是用来测试transfection
是否成功)
做western
用的抗体是Sigma Monoclonal ANTI-FLAG M2 monoclone antibody 1:500
结果出现一些杂band (control组也有)
protein 2有大量表现
protein 1则没有
可是比较3组 扣除都有出现的杂band
Flag-tagged protein 1那组有多出两条约40-50kDa大小的band
请问这有可能是protein 1 degrade?
还是也只是杂band 而我要的protein 1根本不表现
如果是根本不表现 请问可能原因为何?
该如何使它表现?
谢谢各位的回答及指教
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1F：推 bluecsky:antibody会不会用太多?1:500耶..太多的话杂band也会多阿 01/27 12:27
2F：→ bluecsky:这种订来的量跟纯度都够..不需要这麽多吧 01/27 12:28
3F：推 soom:sigma M2 我也有在用，1:2000都还ok 我也建议稀释 01/27 15:27
4F：推 leoblack:sigma M2我们家用到1:10000(1万,没错!!)都还认得到耶~ 03/03 12:04
5F：→ leoblack:1:500会不会太浓了啊?! 03/03 12:05