作者skylawer (skylawer)
看板Biotech
標題Re: [求救] deletion情況的primer設計
時間Tue Jan 29 19:35:08 2008
※ 引述《cyken (Ken)》之銘言：
: |<del>|
: 5'atacatatatgtac...tgtacaggtagcaatatacagtacacagaaacatctgc...aatacccctgaacat 3'
<--------------
primer 1
: 3'tatgtatatacatg...acatgtccatcgttatatgtcatgtgtctttgtagacg...ttatggggacttgta 5'
----------------->
primer 2
step 1: PCR amplify (using ultra-pfu)
step 2: DpnI digest (remove template DNA)
step 3: clean up
step 4: self ligation
step 5: transform into competent cell
只須一天工與一對primer , 就可以得到你要的東西
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.66.215
1F：推 worshiper:blunt end要self ligation似乎會有太多結果啊... 01/29 21:44
2F：→ skylawer:不會有很多種結果 只有成功與失敗這兩種結果. 01/29 21:57
3F：推 blence:這不好,把primer1,2的5'分別增加primer2,1約10~15mer的長度 01/29 22:53
4F：→ blence:這樣template就可以互補,而且只需要step 1,2,5就可成功 01/29 22:56