作者LIAR (墮天使)
看板Biotech
標題[問題] western blot中的DNase和phosphatase.....
時間Wed Jan 30 22:49:19 2008
前面有人提過如果破cell太暴力，連核膜都破掉，genomic DNA跑出來會干擾loading和
定量，所以要加DNase，請問這是指說用non ionic detergent的情況下嗎？
譬如說用SDS當lysis agent，就算外加DNase不也都denature了嗎？
另外那篇文章說sample數目太多，用syringe會OX#$!@#！
那除了sonication以外還有更好的方法除掉genomic DNA嗎？
或是有辦法讓genomic DNA一開始就不要跑出來嗎？
第二個問題也是enzyme，就是讓很多人頭痛的phosphatase。
tkmax說一收完sample立刻定量跑膠，「
一進-80冰箱保存的話就都會degrade掉了」
phosphatase不也是一種protein嗎？而且磷酸根本身也是共價鍵，一般高溫或物理手段
也不應該那麼容易打掉它，
那在有「SDS or -80度」的情況下，為什麼磷酸化蛋白
還能那麼容易degrade呢？
最近開始要學western，麻煩各位指點一下，謝謝。
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太初有道，道與耶和華同在，道就是耶和華。這道太初與耶和華同在。
萬物乃藉祂所造，凡被造的沒有一樣不是藉著祂所造的。生命在祂裡頭，
這生命就是人的光。光照在黑暗裡，黑暗卻不接受光。
吾輩乃生於黑暗，行於黑暗。因神之指引，行向光明；又因撒旦誘惑，回歸黑暗。
我不斷地徘徊於光明與黑暗之間，從被造之日至今，又自今直到那審判之日的來臨。
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◆ From: 123.192.3.78
1F：推 tsubasawolfy:phosphatase的問題可以加inhibitor 01/30 23:10
2F：→ LIAR:tkmax的意思是加inhibitor也沒用.... 01/30 23:13
3F：推 tsubasawolfy:哪篇? 01/30 23:16
4F：推 tsubasawolfy:兩篇都看到了- -a 01/30 23:23
5F：→ tsubasawolfy:genomic DNA的問題從沒遇過 不過像下面另一篇講的 01/30 23:24
6F：→ tsubasawolfy:sonication的方式有差(個人喜好手動打) 01/30 23:25
7F：→ tsubasawolfy:phosphatase的問題 沒做過沒加inhibitor的對照XD 01/30 23:26
8F：→ LIAR:tkmax不是說沒加inhibitor....而是加了"還是效果不好"吧？ 01/30 23:39
9F：推 tsubasawolfy:效果不好的問題．．目前為止我的anti-P-S/T signal 01/30 23:51
10F：→ tsubasawolfy:都很強 而且還有經過IP的摧殘- -a 01/30 23:52