作者LIAR (堕天使)
看板Biotech
标题[问题] western blot中的DNase和phosphatase.....
时间Wed Jan 30 22:49:19 2008
前面有人提过如果破cell太暴力，连核膜都破掉，genomic DNA跑出来会干扰loading和
定量，所以要加DNase，请问这是指说用non ionic detergent的情况下吗？
譬如说用SDS当lysis agent，就算外加DNase不也都denature了吗？
另外那篇文章说sample数目太多，用syringe会OX#$!@#！
那除了sonication以外还有更好的方法除掉genomic DNA吗？
或是有办法让genomic DNA一开始就不要跑出来吗？
第二个问题也是enzyme，就是让很多人头痛的phosphatase。
tkmax说一收完sample立刻定量跑胶，「
一进-80冰箱保存的话就都会degrade掉了」
phosphatase不也是一种protein吗？而且磷酸根本身也是共价键，一般高温或物理手段
也不应该那麽容易打掉它，
那在有「SDS or -80度」的情况下，为什麽磷酸化蛋白
还能那麽容易degrade呢？
最近开始要学western，麻烦各位指点一下，谢谢。
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太初有道，道与耶和华同在，道就是耶和华。这道太初与耶和华同在。
万物乃藉祂所造，凡被造的没有一样不是藉着祂所造的。生命在祂里头，
这生命就是人的光。光照在黑暗里，黑暗却不接受光。
吾辈乃生於黑暗，行於黑暗。因神之指引，行向光明；又因撒旦诱惑，回归黑暗。
我不断地徘徊於光明与黑暗之间，从被造之日至今，又自今直到那审判之日的来临。
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◆ From: 123.192.3.78
1F：推 tsubasawolfy:phosphatase的问题可以加inhibitor 01/30 23:10
2F：→ LIAR:tkmax的意思是加inhibitor也没用.... 01/30 23:13
3F：推 tsubasawolfy:哪篇? 01/30 23:16
4F：推 tsubasawolfy:两篇都看到了- -a 01/30 23:23
5F：→ tsubasawolfy:genomic DNA的问题从没遇过 不过像下面另一篇讲的 01/30 23:24
6F：→ tsubasawolfy:sonication的方式有差(个人喜好手动打) 01/30 23:25
7F：→ tsubasawolfy:phosphatase的问题 没做过没加inhibitor的对照XD 01/30 23:26
8F：→ LIAR:tkmax不是说没加inhibitor....而是加了"还是效果不好"吧？ 01/30 23:39
9F：推 tsubasawolfy:效果不好的问题．．目前为止我的anti-P-S/T signal 01/30 23:51
10F：→ tsubasawolfy:都很强 而且还有经过IP的摧残- -a 01/30 23:52