作者a057687 (a057687)
看板Biotech
標題[求救] 打細胞的方法?
時間Thu Jan 31 11:33:58 2008
最近在養結膜的上皮細胞,我是用explant的方法,剛開始都長得很好,但一旦做passage
時就遇到大問題了,我用1mM EDTA 之 PBS先wash cell後再用 0.05%trypsin+1mM EDTA
來打細胞,結果不但很難打下來,而且打下來的細胞幾乎都死掉了,我查了書,發現很多
眼部的細胞都是用trypsin來打,濃度跟配方也都差不多,只是trypsin的時間都沒有明確的
記載,我已經失敗很多次了,想請問大家除了trypsin之外,是否可以只用collagenase來打
細胞,濃度跟時間到底要怎麼控制，因為我們實驗室現在有一瓶collagenase,因為一直
失敗,所以想換個方法試試看,請大家幫幫忙,感激不盡!!
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◆ From: 140.117.33.128
1F：推 tcwin:trypsin作用時間? 01/31 12:22
2F：→ a057687:我先作用5分鐘放在incubator內,發現大部分都下不來,又再作 01/31 13:35
3F：→ a057687:用了10分鐘後才打了8成下來 01/31 13:37
4F：推 wenye:我不知道跟細胞種類沒有關係.不過我都是在加Trypsin時不集中 01/31 18:10
5F：→ wenye:一處加.加了之後會搖一下讓他均勻.放進incubator一分鐘再打 01/31 18:12
6F：→ wenye:而且trypsin可以作用那麼久喔...我怎麼覺得我怎麼覺得是因為 01/31 18:14
7F：→ wenye:作用太久才死掉.不過我做的不是眼部細胞所以我不是很確定 01/31 18:15
8F：推 tincta:我trp都作用2-3min，因為我記得是最多10min後cell就開始死 01/31 18:32
9F：推 zerpher:試試看用0.25%trypsin 30sec~1min 01/31 20:49
10F：→ zoom8080:用顯微鏡看比較準，每種細胞不太一樣，發現細胞開始有要 01/31 23:25
11F：→ zoom8080:浮起來以後，就用手拍拍 flask 應該很快就下來了!! 01/31 23:26
12F：推 qqo8855436:把medium 洗乾淨點....多washr幾次 殘留fbs會降低打的 02/01 20:04