作者a057687 (a057687)
看板Biotech
标题[求救] 打细胞的方法?
时间Thu Jan 31 11:33:58 2008
最近在养结膜的上皮细胞,我是用explant的方法,刚开始都长得很好,但一旦做passage
时就遇到大问题了,我用1mM EDTA 之 PBS先wash cell後再用 0.05%trypsin+1mM EDTA
来打细胞,结果不但很难打下来,而且打下来的细胞几乎都死掉了,我查了书,发现很多
眼部的细胞都是用trypsin来打,浓度跟配方也都差不多,只是trypsin的时间都没有明确的
记载,我已经失败很多次了,想请问大家除了trypsin之外,是否可以只用collagenase来打
细胞,浓度跟时间到底要怎麽控制，因为我们实验室现在有一瓶collagenase,因为一直
失败,所以想换个方法试试看,请大家帮帮忙,感激不尽!!
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◆ From: 140.117.33.128
1F：推 tcwin:trypsin作用时间? 01/31 12:22
2F：→ a057687:我先作用5分钟放在incubator内,发现大部分都下不来,又再作 01/31 13:35
3F：→ a057687:用了10分钟後才打了8成下来 01/31 13:37
4F：推 wenye:我不知道跟细胞种类没有关系.不过我都是在加Trypsin时不集中 01/31 18:10
5F：→ wenye:一处加.加了之後会摇一下让他均匀.放进incubator一分钟再打 01/31 18:12
6F：→ wenye:而且trypsin可以作用那麽久喔...我怎麽觉得我怎麽觉得是因为 01/31 18:14
7F：→ wenye:作用太久才死掉.不过我做的不是眼部细胞所以我不是很确定 01/31 18:15
8F：推 tincta:我trp都作用2-3min，因为我记得是最多10min後cell就开始死 01/31 18:32
9F：推 zerpher:试试看用0.25%trypsin 30sec~1min 01/31 20:49
10F：→ zoom8080:用显微镜看比较准，每种细胞不太一样，发现细胞开始有要 01/31 23:25
11F：→ zoom8080:浮起来以後，就用手拍拍 flask 应该很快就下来了!! 01/31 23:26
12F：推 qqo8855436:把medium 洗乾净点....多washr几次 残留fbs会降低打的 02/01 20:04