作者seal0413 (seal)
看板Biotech
標題Re: [求救＞＞為什麼用pCRII-TOPO cloning vector꘠…
時間Thu Jan 31 13:01:48 2008
※ 引述《seal0413 (seal)》之銘言：
: pCRII-TOPO聽說是最好接也較貴的cloning系統
: 我的pcr product 大約 140bp左右
: 我挑藍白有挑到
: 抽plasmid 也有比vector高一點(我跑膠跑0.8%且第一條DYE跳海後又多跑一下)
: 只是去切enzyme ECO1(VECTOR上的)
: 就怎樣也切不出 140bp左右的位置
: 請各位有用過TOPO的大大幫忙
: 感謝不盡^^
我是原po
因為我最近這個問題解決了
所以說po來和大家分享
其實啊
切不動的原因是因為 pCRII-TOPO kit過期了
因為我家學弟也挑不到
所以我老闆就說kit重定再做一次
重定時我有問廠商
廠商說
此kit保存期限最多是4-6個月
假如你重覆使用拿進拿出(有放冰寶)
保存的壽命會更減少
因為我們家的kit已經放了1年多
所以亂接一些東西進去是很正常的
買了新kit
實驗終於是做出來
只是很感概的
在一開始實驗做不出來的同時只有重做再重做
又有誰會先想到kit的問題呢
我們實驗花了3個月才找到問題
其中我試了2次
我家學弟試了3次
浪費很多時間
也跑了很多gel和mini kit ><"
總之有人說過
"實驗那麼好做就不會輪到你來做"
雖然是如此
很多時候
還是滿無奈的
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◆ From: 140.128.140.71
1F：推 Liat:這就是經驗（茶～），不過你們都沒想到要作control嗎？ 01/31 13:07
2F：→ seal0413:就是因為有做才挑不到...老闆說"再做一次吧" 01/31 13:18
3F：→ seal0413:有做才知道自己沒挑到><"只是沒想到會是kit的問題 01/31 13:19
4F：推 tin0101:有時候我都會問業務比較直接，不過國外品牌在台灣好像都 01/31 17:53
5F：→ tin0101:沒有自己的lab可以測試，所以後來我都買國產品居多了1 01/31 17:54
6F：推 sinwam:這告訴我們要做實驗前要記得先檢查保存期限與存放位置 01/31 23:02