作者seal0413 (seal)
看板Biotech
标题Re: [求救＞＞为什麽用pCRII-TOPO cloning vector꘠…
时间Thu Jan 31 13:01:48 2008
※ 引述《seal0413 (seal)》之铭言：
: pCRII-TOPO听说是最好接也较贵的cloning系统
: 我的pcr product 大约 140bp左右
: 我挑蓝白有挑到
: 抽plasmid 也有比vector高一点(我跑胶跑0.8%且第一条DYE跳海後又多跑一下)
: 只是去切enzyme ECO1(VECTOR上的)
: 就怎样也切不出 140bp左右的位置
: 请各位有用过TOPO的大大帮忙
: 感谢不尽^^
我是原po
因为我最近这个问题解决了
所以说po来和大家分享
其实啊
切不动的原因是因为 pCRII-TOPO kit过期了
因为我家学弟也挑不到
所以我老板就说kit重定再做一次
重定时我有问厂商
厂商说
此kit保存期限最多是4-6个月
假如你重覆使用拿进拿出(有放冰宝)
保存的寿命会更减少
因为我们家的kit已经放了1年多
所以乱接一些东西进去是很正常的
买了新kit
实验终於是做出来
只是很感概的
在一开始实验做不出来的同时只有重做再重做
又有谁会先想到kit的问题呢
我们实验花了3个月才找到问题
其中我试了2次
我家学弟试了3次
浪费很多时间
也跑了很多gel和mini kit ><"
总之有人说过
"实验那麽好做就不会轮到你来做"
虽然是如此
很多时候
还是满无奈的
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.128.140.71
1F：推 Liat:这就是经验（茶～），不过你们都没想到要作control吗？ 01/31 13:07
2F：→ seal0413:就是因为有做才挑不到...老板说"再做一次吧" 01/31 13:18
3F：→ seal0413:有做才知道自己没挑到><"只是没想到会是kit的问题 01/31 13:19
4F：推 tin0101:有时候我都会问业务比较直接，不过国外品牌在台湾好像都 01/31 17:53
5F：→ tin0101:没有自己的lab可以测试，所以後来我都买国产品居多了1 01/31 17:54
6F：推 sinwam:这告诉我们要做实验前要记得先检查保存期限与存放位置 01/31 23:02