※ 引述《antisense (sense)》之銘言： : ※ [本文轉錄自 Biology 看板] : 作者: antisense (sense) 看板: Biology : 標題: [問題] 關於gene knockout mice過程毛色的問題 : 時間: Tue Feb 5 13:39:54 2008 : 【問題】： : 請問教科書上面，將已作過one copy gene targeted的ES cell，放入psudopregnant mother : 後，產生的後代，是chimeric mice，然後再將chimeric mice與正常的mice交配，來產生 : 最終的gene knockout mice : 【問題起因】： : 1 為何要利用chimeric mice與正常的mice交配，不直接讓chimeric mice之間相互交配產 : 生two copy knockout? 幾個理由 1.你的chimera的germ cell不一定會有target進去的gene 所以直接配不一定會拿到-/-的老鼠 而且就繁殖策略上 直接拿到-/-也不是最理想的方法 2.你要的strain的老鼠 不一定是打進去ES cell那個strain 3.另一個理由是chimera不便宜也很難拿到 你要做microinjection把ES cell打到embryo裡面 再implant到uterus裡 等chimera出生 19~21天 所以是先拿chimera(通常是公的)跟wild type(母)配 運氣好拿到的whole body該基因都是+/-的mice 就可以說拿到germ line了 之後再依實驗的需求做backcross : 2課本上說，chimeric mice和正常的mice交配，產生的knockout mice整個過程的基因型， : 及毛色的表現型，到底是如何？ : 【個人看法】： 是這樣 embryo跟ES cell通常是兩種不同毛色的老鼠提供 比方embryo是C57B6(黑) ES cell是129SV(白) 那麼做出來的chimera 就是灰的 或是黑白毛色一塊一塊 像下圖 http://140.112.133.74/0607/pic5.png 這時可以用毛色判斷ES cell佔chimera的比例多高 當然越高你拿去配得到germ line的機率越高 做完genotype 確定拿到germ line後 再把germ line的老鼠跟你要的strain的老鼠做backcross 這個樣字大概五代之後 你的老鼠除了knock-out的gene 其餘的都會跟你要的strain一樣 以embryo是C57B6(黑) ES cell是129SV(白)來說 Genotype 毛色 Chimera (有些是+/+ 有些是+/-) 花or灰 F1 (+/- ,whole body) 逐漸變黑 F2 (+/- or -/- ,whole body) 黑 就這樣 # -- 如果孔子是那待沽的玉 我便是待斟的酒 用一生的時間 蘊釀自己的濃度 只為等待剎那的傾注 張曉風 釀酒的理由 --

※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 221.169.50.122 ※ 編輯: boyo 來自: 221.169.50.122 (02/05 16:55) ※ 編輯: boyo 來自: 221.169.50.122 (02/05 17:01)