※ 引述《antisense (sense)》之铭言： : ※ [本文转录自 Biology 看板] : 作者: antisense (sense) 看板: Biology : 标题: [问题] 关於gene knockout mice过程毛色的问题 : 时间: Tue Feb 5 13:39:54 2008 : 【问题】： : 请问教科书上面，将已作过one copy gene targeted的ES cell，放入psudopregnant mother : 後，产生的後代，是chimeric mice，然後再将chimeric mice与正常的mice交配，来产生 : 最终的gene knockout mice : 【问题起因】： : 1 为何要利用chimeric mice与正常的mice交配，不直接让chimeric mice之间相互交配产 : 生two copy knockout? 几个理由 1.你的chimera的germ cell不一定会有target进去的gene 所以直接配不一定会拿到-/-的老鼠 而且就繁殖策略上 直接拿到-/-也不是最理想的方法 2.你要的strain的老鼠 不一定是打进去ES cell那个strain 3.另一个理由是chimera不便宜也很难拿到 你要做microinjection把ES cell打到embryo里面 再implant到uterus里 等chimera出生 19~21天 所以是先拿chimera(通常是公的)跟wild type(母)配 运气好拿到的whole body该基因都是+/-的mice 就可以说拿到germ line了 之後再依实验的需求做backcross : 2课本上说，chimeric mice和正常的mice交配，产生的knockout mice整个过程的基因型， : 及毛色的表现型，到底是如何？ : 【个人看法】： 是这样 embryo跟ES cell通常是两种不同毛色的老鼠提供 比方embryo是C57B6(黑) ES cell是129SV(白) 那麽做出来的chimera 就是灰的 或是黑白毛色一块一块 像下图 http://140.112.133.74/0607/pic5.png 这时可以用毛色判断ES cell占chimera的比例多高 当然越高你拿去配得到germ line的机率越高 做完genotype 确定拿到germ line後 再把germ line的老鼠跟你要的strain的老鼠做backcross 这个样字大概五代之後 你的老鼠除了knock-out的gene 其余的都会跟你要的strain一样 以embryo是C57B6(黑) ES cell是129SV(白)来说 Genotype 毛色 Chimera (有些是+/+ 有些是+/-) 花or灰 F1 (+/- ,whole body) 逐渐变黑 F2 (+/- or -/- ,whole body) 黑 就这样 # -- 如果孔子是那待沽的玉 我便是待斟的酒 用一生的时间 蕴酿自己的浓度 只为等待刹那的倾注 张晓风 酿酒的理由 --

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