作者snowypuppy (啦啦啦....)
看板Biotech
標題[問題] 關於restriction enzyme digest
時間Wed Feb 20 02:26:51 2008
想請問大家
我現在用EcoR1及HindIII將vector及insert做RE digest
做ligation之後長出來的怎麼挑colony卻都是vector的size
懷疑是vector沒有切乾淨 (我是取5ug 切2小時) 之後做gel purify
問題是兩個enzyme切下來的片段距離很小 只有20-30bp
使我無法在跑膠時確認是否切乾淨
不知道有沒有其他辦法可以確認
或是實驗步驟需要改進的地方 感謝大家!
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 59.115.51.145
1F：推 alaric:需要over digestion, 最好各個EZ分開reaction. 02/20 03:43
2F：推 mtdas:5ug會不會太多? 02/20 12:39
3F：推 soom:vector加作CIP避免self ligation 02/20 13:24
4F：推 kitiara:linear和circular form的vector是分的開的 02/20 13:41
5F：推 aggaci:PCR可以確認 02/20 15:17
6F：→ snowypuppy:謝謝大家的回答～～我再繼續努力 02/21 00:57