作者snowypuppy (啦啦啦....)
看板Biotech
标题[问题] 关於restriction enzyme digest
时间Wed Feb 20 02:26:51 2008
想请问大家
我现在用EcoR1及HindIII将vector及insert做RE digest
做ligation之後长出来的怎麽挑colony却都是vector的size
怀疑是vector没有切乾净 (我是取5ug 切2小时) 之後做gel purify
问题是两个enzyme切下来的片段距离很小 只有20-30bp
使我无法在跑胶时确认是否切乾净
不知道有没有其他办法可以确认
或是实验步骤需要改进的地方 感谢大家!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 59.115.51.145
1F：推 alaric:需要over digestion, 最好各个EZ分开reaction. 02/20 03:43
2F：推 mtdas:5ug会不会太多? 02/20 12:39
3F：推 soom:vector加作CIP避免self ligation 02/20 13:24
4F：推 kitiara:linear和circular form的vector是分的开的 02/20 13:41
5F：推 aggaci:PCR可以确认 02/20 15:17
6F：→ snowypuppy:谢谢大家的回答～～我再继续努力 02/21 00:57