作者umbrally (成長)
看板Biotech
標題[求救] 小片段的DNA分離
時間Wed Feb 20 14:20:54 2008
我要分離小片段的DNA(約六百多bp)
使用洋菜膠跑電泳來分離
之前使用的是 1%或1.4%的濃度
用17V跑大約18個小時
但是 當把band切下來純化出DNA後
再去跑電泳測試純不純時 往往都不乾淨
於是就要再純化個第二次第三次
到最後東西都沒了~~~~~
所以想請教一下 這種小片段的DNA
用多少濃度的gel 多小的電壓
可以較容易分離到呢???謝謝
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.52.129
1F：推 dankai:我用1.2%的gel~100V就可以分開! 18個小時會不會太久了~ 02/20 14:30
2F：→ dankai:你再用電泳跑一次...濃度不是已經很低了!應該會越跑越淡~ 02/20 14:32
3F：→ umbrally:是可以分開 可是純化就不是很乾淨 單條band 02/20 14:48
4F：→ umbrally:再跑一次電泳只是拿一點點去測測看~~~ 02/20 14:49
5F：推 hek:你用什麼方法純化band DNA? 通常切band得到的DNA已經夠純 02/22 02:07
6F：→ hek:如果你還拿到多個產物 可能 1.原來digestion不完全 02/22 02:08
7F：→ hek:2.你的DNA sequence會產生dimer 或有inverted repeat 02/22 02:09
8F：→ hek:可以試著將純化產物重新anneal，或是用enzyme切 02/22 02:11
9F：→ hek:看能不能拿到預期大小的product 02/22 02:13