作者umbrally (成长)
看板Biotech
标题[求救] 小片段的DNA分离
时间Wed Feb 20 14:20:54 2008
我要分离小片段的DNA(约六百多bp)
使用洋菜胶跑电泳来分离
之前使用的是 1%或1.4%的浓度
用17V跑大约18个小时
但是 当把band切下来纯化出DNA後
再去跑电泳测试纯不纯时 往往都不乾净
於是就要再纯化个第二次第三次
到最後东西都没了~~~~~
所以想请教一下 这种小片段的DNA
用多少浓度的gel 多小的电压
可以较容易分离到呢???谢谢
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.52.129
1F：推 dankai:我用1.2%的gel~100V就可以分开! 18个小时会不会太久了~ 02/20 14:30
2F：→ dankai:你再用电泳跑一次...浓度不是已经很低了!应该会越跑越淡~ 02/20 14:32
3F：→ umbrally:是可以分开 可是纯化就不是很乾净 单条band 02/20 14:48
4F：→ umbrally:再跑一次电泳只是拿一点点去测测看~~~ 02/20 14:49
5F：推 hek:你用什麽方法纯化band DNA? 通常切band得到的DNA已经够纯 02/22 02:07
6F：→ hek:如果你还拿到多个产物 可能 1.原来digestion不完全 02/22 02:08
7F：→ hek:2.你的DNA sequence会产生dimer 或有inverted repeat 02/22 02:09
8F：→ hek:可以试着将纯化产物重新anneal，或是用enzyme切 02/22 02:11
9F：→ hek:看能不能拿到预期大小的product 02/22 02:13