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標 題Re: [求救] Nickel beads可以拿來做Co-IP嗎?
發信站清華生命科學 BBS (Thu Feb 21 02:50:38 2008)
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建議用 protein A/G beads coat anti-his-tag antibody
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莫非定律:
到了期末才會想起期初曾選了一門課卻一直沒去上
補充定律:
拿到成績單才發現上了一學期的課忘了去考期末考
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※ Origin: 生命科學 BBS <bbs.life.nthu.edu.tw>
◆ From: boblu.STUDENT.CWRU.Edu
1F：推 hosaile:我有想過 但是target protein的size和IgG太相近 02/21 12:24
2F：→ hosaile:作western壓片的時候 target protein的band會被IgG的訊號 02/21 12:25
3F：→ hosaile:蓋掉 所以才想用Ni-beads 02/21 12:26
4F：推 boblu:IP-western 不是這樣做的好嘛... 02/21 23:03
5F：→ boblu:先用M抗his抗體作IP 然後用R抗his抗體作western 02/21 23:04
6F：→ boblu:最後用G抗R-Ig抗體作二抗啊 02/21 23:04
7F：推 blence:六百嚴肅了,其實h只要把標題改成用Ni-beads做pull-down即可 02/22 03:48
8F：→ blence:不過要小心容易trapping以及要挑選適合這個方式的control 02/22 03:50
9F：推 hosaile:我知道可以用不童species的抗體來做就不會有我說的現象 02/22 11:29
10F：→ hosaile:只是實驗室剛好沒有其他species的抗體 所以才想說用現成的 02/22 11:30
11F：→ hosaile:東西來做 boblu兄別生氣啊~ 02/22 11:30
12F：推 boblu:我沒有反對用Ni-bead啦. pull-down 原po文裡有啦 02/23 00:16
13F：→ boblu:我只是說如果要用抗體抓 那 western 的時候就要用不同物種 02/23 00:17
14F：→ boblu:叫你們老闆買嘛 抗his的抗體好便宜的 有時廠商還拿來當贈品 02/23 00:18