作者hongdow (紅豆)
看板Biotech
標題Re: [求救]請問,為什麼使用lysis buffer要在冰上阿 …
時間Fri Feb 22 00:20:30 2008
※ 引述《hongdow (紅豆)》之銘言：
: 想請問各位前輩幾個問題,拜託了Orz
: 疑問一, 為什麼使用Lysis buffer 要在冰上或4度下與細胞作用阿?常溫下不能嗎?
: 疑問二,那麼大家都把配好的lysis buffer儲存在4度C冰箱嗎?(我是這麼做的)
: 疑問三,關於板上有很多前輩都是自己配lysis buffer的,但在配完後,怎麼知道自己
: 配的lysisi buffer 準確性跟效果到底算好還是不好呢,畢竟跟買的kit相比較
: 下,kit會貴一定有它的效果在,所以很懷疑自己配出來的真的能用嗎???
: 以上幾個問題拜託各位學長,學姐,同學替我解答,非常謝謝您^^
謝謝大家的解答,
但我還是有幾個問題想請教^^
疑問四. 怎麼確定自己所配的Lysis buffer有將細胞裡面的全部蛋白質都已經萃取出
來呢?如果不跑電泳的話就不能確定了嗎?
因為我純粹只是想用lysis buffer將細胞蛋白質萃取出來,然後
使用BCA kit去定量,也就是測OD值後去fit檢量線(BSA濃度 VS. OD值)
疑問五. 若我再固定細胞數目的條件下,使用自己配的lysis buffer和購買的lysis kit
去萃取細胞蛋白質,最後由檢量線索得之結果發現,兩者相差很大,那是不是
意味著我所配的lysis buffer有問題呢??(不知道大家有沒有做過這樣的比較> <
拜託各位的腦袋瓜囉...謝謝^^
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◆ From: 218.166.242.4
1F：→ tsubasawolfy:Q4你要如何跑電泳確認你的疑問=w=? 02/22 00:37
2F：→ tsubasawolfy:silver?CB?WB? 跑出來應該也都是一條吧- -a 02/22 00:38
3F：推 blence:lysis buffer配方或內含量不同也會影響OD,你好像太介意了有 02/22 03:33
4F：→ blence:沒有完全作用,可是只要detergent,salt等有一般用量就夠了 02/22 03:34
5F：→ blence:有些實驗的確是kit效果好,但你這裡,kit只是實驗方便而已 02/22 03:37
6F：推 bluecsky:就說lysis buffer只要配得跟kit公開的配方一樣的話 02/22 06:50
7F：→ bluecsky:基本上不會有什麼差異(前提是除了buffer以外其他都一樣) 02/22 06:50
8F：→ bluecsky:要是真的很害怕就把buffer重配要不然就都買kit吧 02/22 06:52
9F：推 bluecsky:歐對了..你是萃取total protein的話..跑電泳 02/22 07:08
10F：→ bluecsky:看到的也只是一堆band而已 02/22 07:08
11F：推 machin:bluecsky說的跟我之前推文的意思是一樣的 我再補充一下 02/22 13:09
12F：推 machin:基本上lysis buffer因detergent跟salt不同,而有lyse程度不 02/22 13:15
13F：→ machin:同 視你想看的protein而去選擇適合的lysis buffer 02/22 13:16
14F：→ hongdow:謝謝各位的腦袋瓜囉,非常感謝^^ 02/22 16:44