作者hongdow (红豆)
看板Biotech
标题Re: [求救]请问,为什麽使用lysis buffer要在冰上阿 …
时间Fri Feb 22 00:20:30 2008
※ 引述《hongdow (红豆)》之铭言：
: 想请问各位前辈几个问题,拜托了Orz
: 疑问一, 为什麽使用Lysis buffer 要在冰上或4度下与细胞作用阿?常温下不能吗?
: 疑问二,那麽大家都把配好的lysis buffer储存在4度C冰箱吗?(我是这麽做的)
: 疑问三,关於板上有很多前辈都是自己配lysis buffer的,但在配完後,怎麽知道自己
: 配的lysisi buffer 准确性跟效果到底算好还是不好呢,毕竟跟买的kit相比较
: 下,kit会贵一定有它的效果在,所以很怀疑自己配出来的真的能用吗???
: 以上几个问题拜托各位学长,学姐,同学替我解答,非常谢谢您^^
谢谢大家的解答,
但我还是有几个问题想请教^^
疑问四. 怎麽确定自己所配的Lysis buffer有将细胞里面的全部蛋白质都已经萃取出
来呢?如果不跑电泳的话就不能确定了吗?
因为我纯粹只是想用lysis buffer将细胞蛋白质萃取出来,然後
使用BCA kit去定量,也就是测OD值後去fit检量线(BSA浓度 VS. OD值)
疑问五. 若我再固定细胞数目的条件下,使用自己配的lysis buffer和购买的lysis kit
去萃取细胞蛋白质,最後由检量线索得之结果发现,两者相差很大,那是不是
意味着我所配的lysis buffer有问题呢??(不知道大家有没有做过这样的比较> <
拜托各位的脑袋瓜罗...谢谢^^
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◆ From: 218.166.242.4
1F：→ tsubasawolfy:Q4你要如何跑电泳确认你的疑问=w=? 02/22 00:37
2F：→ tsubasawolfy:silver?CB?WB? 跑出来应该也都是一条吧- -a 02/22 00:38
3F：推 blence:lysis buffer配方或内含量不同也会影响OD,你好像太介意了有 02/22 03:33
4F：→ blence:没有完全作用,可是只要detergent,salt等有一般用量就够了 02/22 03:34
5F：→ blence:有些实验的确是kit效果好,但你这里,kit只是实验方便而已 02/22 03:37
6F：推 bluecsky:就说lysis buffer只要配得跟kit公开的配方一样的话 02/22 06:50
7F：→ bluecsky:基本上不会有什麽差异(前提是除了buffer以外其他都一样) 02/22 06:50
8F：→ bluecsky:要是真的很害怕就把buffer重配要不然就都买kit吧 02/22 06:52
9F：推 bluecsky:欧对了..你是萃取total protein的话..跑电泳 02/22 07:08
10F：→ bluecsky:看到的也只是一堆band而已 02/22 07:08
11F：推 machin:bluecsky说的跟我之前推文的意思是一样的 我再补充一下 02/22 13:09
12F：推 machin:基本上lysis buffer因detergent跟salt不同,而有lyse程度不 02/22 13:15
13F：→ machin:同 视你想看的protein而去选择适合的lysis buffer 02/22 13:16
14F：→ hongdow:谢谢各位的脑袋瓜罗,非常感谢^^ 02/22 16:44