作者latte366 ( )
看板Biotech
標題[問題] 關於配SDS-Page Gel的tris-base buffer 的PH值問題
時間Thu Feb 28 02:31:08 2008
關於配western的SDS-Gel 的buffer (濃度皆為1M)
配stacking gel (上膠) 的 tris-base buffer pH為6.8
配running gel (下膠) 的 tris-base buffer pH為8.8
問題來了
最近忽然想到這兩種buffer回不會像養細胞的medium一樣
配一段時間 隨著暴露空氣的時間頻率增加 pH值會會來越高
於是 拿著四個月前配的這兩罐buffer去重測pH值
果然 配上膠的 pH 從 6.8 --> 7.6
配下膠的 pH 從 8.8 --> 9.4
我給自己的解釋是 雖然都有冰4度C冰箱 不過或許是放太久吧
沒關係! 立刻重配
配完之後 看著pH meter 顯示 6.8 與 8.8 爽!!
馬上用新的buffer做兩片膠來跑
等膠凝的過程
不曉得哪根筋又不對 又拿著這兩罐buffer再去測PH值
重點來了!!
pH居然又升高了 6.8--> 7.2
8.8--> 9.1
疑惑的當下 拿起手邊的HCL (6N)做滴定 (用濃的是怕體積改變太多影響Tris濃度)
OK 沒兩下滴定回原來pH 可是當我拿起罐子搖一搖 再mix
再重新測PH 神奇的是 pH值又上升了!!!!
我是沒有測一直搖一直搖 它可以上升到什麼樣的程度啦
不過我猜 到一定的程度後應該就會停下來 (不然就爆表啦!)
補充:
1.不大可能是藥品壞掉 因為學長姐們也適用同一罐配 雖然他們第一次測完pH後
就再也沒再測過 不過western也還是順順的跑阿
2.HCL也不大可能有問題 從12N會冒煙的那種熱騰騰配好的 聞起來很新鮮阿! XD
3.pH meter壞掉的可能性也很低 測MQ純水 pH沒問題 而且搖一搖 晃一晃
pH也不會升高
4.glycin-base 有完全溶解了 stir-bar讓它轉滿久的 至少我肉眼看不出有沉澱
所以應該也不是配成過飽合的沉澱導致
話說pH可以變了又變 變了又變嗎?
我已經在考慮要不要以後做的時候都現配了......Orz
請問各位前輩有類似的情形嗎?
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◆ From: 140.116.93.52
※ 編輯: latte366 來自: 140.116.93.52 (02/28 02:38)
1F：推 dankai:我覺得你還是請廠商來看一下pH meter會比較好~ 02/28 02:41
2F：→ dankai:之前有別間實驗室的製水系統出問題~滴定完再定量時..水的問 02/28 02:42
3F：→ dankai:題...讓原本配好的buffer pH跑掉~ 他們是事後再測時發現! 02/28 02:43
4F：→ dankai:之前實驗室有學弟操作比較急...在校正時~還沒完全混合均勻 02/28 02:45
5F：→ dankai:就直接測....也是出問題~~~~ 你參考看看吧!! 02/28 02:46
6F：→ latte366:感謝d大的回覆 Biology板有人幫我解決了 是溫度問題 ^^ 02/28 11:27
7F：→ latte366:我也有回推文在下面 有興趣的人可以去看看喔 02/28 11:29