作者latte366 ( )
看板Biotech
标题[问题] 关於配SDS-Page Gel的tris-base buffer 的PH值问题
时间Thu Feb 28 02:31:08 2008
关於配western的SDS-Gel 的buffer (浓度皆为1M)
配stacking gel (上胶) 的 tris-base buffer pH为6.8
配running gel (下胶) 的 tris-base buffer pH为8.8
问题来了
最近忽然想到这两种buffer回不会像养细胞的medium一样
配一段时间 随着暴露空气的时间频率增加 pH值会会来越高
於是 拿着四个月前配的这两罐buffer去重测pH值
果然 配上胶的 pH 从 6.8 --> 7.6
配下胶的 pH 从 8.8 --> 9.4
我给自己的解释是 虽然都有冰4度C冰箱 不过或许是放太久吧
没关系! 立刻重配
配完之後 看着pH meter 显示 6.8 与 8.8 爽!!
马上用新的buffer做两片胶来跑
等胶凝的过程
不晓得哪根筋又不对 又拿着这两罐buffer再去测PH值
重点来了!!
pH居然又升高了 6.8--> 7.2
8.8--> 9.1
疑惑的当下 拿起手边的HCL (6N)做滴定 (用浓的是怕体积改变太多影响Tris浓度)
OK 没两下滴定回原来pH 可是当我拿起罐子摇一摇 再mix
再重新测PH 神奇的是 pH值又上升了!!!!
我是没有测一直摇一直摇 它可以上升到什麽样的程度啦
不过我猜 到一定的程度後应该就会停下来 (不然就爆表啦!)
补充:
1.不大可能是药品坏掉 因为学长姐们也适用同一罐配 虽然他们第一次测完pH後
就再也没再测过 不过western也还是顺顺的跑阿
2.HCL也不大可能有问题 从12N会冒烟的那种热腾腾配好的 闻起来很新鲜阿! XD
3.pH meter坏掉的可能性也很低 测MQ纯水 pH没问题 而且摇一摇 晃一晃
pH也不会升高
4.glycin-base 有完全溶解了 stir-bar让它转满久的 至少我肉眼看不出有沉淀
所以应该也不是配成过饱合的沉淀导致
话说pH可以变了又变 变了又变吗?
我已经在考虑要不要以後做的时候都现配了......Orz
请问各位前辈有类似的情形吗?
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.116.93.52
※ 编辑: latte366 来自: 140.116.93.52 (02/28 02:38)
1F：推 dankai:我觉得你还是请厂商来看一下pH meter会比较好~ 02/28 02:41
2F：→ dankai:之前有别间实验室的制水系统出问题~滴定完再定量时..水的问 02/28 02:42
3F：→ dankai:题...让原本配好的buffer pH跑掉~ 他们是事後再测时发现! 02/28 02:43
4F：→ dankai:之前实验室有学弟操作比较急...在校正时~还没完全混合均匀 02/28 02:45
5F：→ dankai:就直接测....也是出问题~~~~ 你参考看看吧!! 02/28 02:46
6F：→ latte366:感谢d大的回覆 Biology板有人帮我解决了 是温度问题 ^^ 02/28 11:27
7F：→ latte366:我也有回推文在下面 有兴趣的人可以去看看喔 02/28 11:29