作者littlehappy (小小的小快樂)
看板Biotech
標題Re: [問題] buffer pH值 會怪異的上升!! (已解決)
時間Thu Feb 28 18:01:59 2008
(((原文恕刪...)))
藉著這個標題我有一個問題想請教各位板友~
如果Tris-Hcl會隨著溫度影響pH值
那以後注膠做SDS-PAGE的時候是不是都要維持調Tris-Hcl的那個溫度才行?
不然這樣Gel的pH值不對,跑出來的band是不是也會受到影響?
而running buffer也有含Tris-base，在冰箱冰存與室溫回溫是否pH值也會改變?
(雖然我們家running buffer是會測pH值，但是不調整pH值)
因為之前用GE的電泳槽(Amersham SE250)
跑完有的時候會在Gel上看到藍色的dye變成黃色的現象
跟GE技術人員請教以及查看了板上的，都說是pH值的改變造成的
原先我們以為是電泳過熱現象造成，所以置於冰上跑(我們cold room壞掉)
現在看到這篇文章突然想到，會不會是溫度造成pH值改變而產生這樣的結果
黃掉的地方似乎就不會在電泳往下跑了，附近的band也會被拖成歪歪的
要怎麼改善才好呢???
希望有經驗或的板友可以給一點改善的建議...謝謝<(_ _)>
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◆ From: 163.15.175.170
1F：推 blence:雖然說"Tris-Hcl會隨著溫度影響pH值"不能說全錯,但事實上是 02/28 18:52
2F：→ blence:pH值的量測值會隨著溫度而改變,"而且"在滴定調整pH值的酸鹼 02/28 18:53
3F：→ blence:中和過程的放熱反應是造成無法確認pH值的主因,你完全失焦了 02/28 18:55
4F：→ blence:另外,有些人調Tris會因為調過頭又加鹼,過多的酸鹼中和產生 02/28 18:58
5F：→ blence:的鹽,就很有可能使Gel產生溫度過高,band醜醜的情況 02/28 18:59
6F：→ blence:要解決問題去別的lab就好了,這普遍的技術沒你想得這麼複雜 02/28 19:01
7F：推 geltukou:呃..我這幾天才碰到這個問題，重配過Running Buffer就正 02/29 22:44
8F：→ geltukou:常了。在發現之前跟老師討論過，也可能是電泳系統的電壓 02/29 22:45
9F：→ geltukou:太高或是電泳槽白金線的問題。 02/29 22:46
10F：→ geltukou:我的狀況的話，應該是O/N的時候耍笨.....= =;;; 02/29 22:48