作者FIREWAVE ()
看板Biotech
標題[求救] 蛋白質溼式transfer至PVDF membrane的怪現象
時間Fri Mar 7 18:20:56 2008
已有爬過文,不過沒有看到跟我一樣的問題...
我們家是用 C.B.S SCIENTIFIC DCX-700的機器做transfer
機器圖片連結：
http://www.cbsscientific.com/index.asp?PageAction=VIEWPROD&ProdID=57#
我一次是transfer一片gel,另一側釋放一塊擋板（機器當初附的）
transfer的condition是 150 mA 90 min 4度C
PVDF membrane: 8cm X 6cm
transfer buffer: 0.025 M Tris
0.192 M Glycine
0.10% SDS
20% methanol
看到的奇怪現象是在transfer之後拿membrane去染Ponceau S,
發現membrane上面出現的是用來夾住gel跟membran的夾子上格子的紋路
整張membrane上都是空白格子中間挾著紅色方塊的圖形
只有最旁邊的marker是一條一條的band
請問有人遇過跟我一樣的情形嗎？
是機器的問題或是我操作上在哪裡有可能出現忽略的部份嗎？
麻煩大家指教了.......謝謝
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.115.48.151
1F：推 hek:你夾子沒洗乾淨 有殘留的鹽類 下次用之前多沖幾次就沒事了 03/07 20:42
2F：→ FIREWAVE:感謝回答 我再去試試看 03/08 10:11
3F：推 mournermind:Ponceau S不是染蛋白嗎 為什麼和鹽類有關呢?問一下... 03/08 15:03
4F：→ FIREWAVE:感謝一樓的回答 我把transfer的夾子洗乾淨 transfer 03/10 16:54
5F：→ FIREWAVE:就ok了 謝謝 03/10 16:56
6F：→ FIREWAVE:回答三樓：整件事情是因為trnasfer完之後用Ponceau S染, 03/10 16:57
7F：→ FIREWAVE:發現transfer到membrane的protein pattern很怪,跟 03/10 16:58
8F：→ FIREWAVE:transfer用的夾子一樣 一格一格的（沒有band）所以推測 03/10 17:00
9F：→ FIREWAVE:在做transfer時,出了問題,然後問題出在夾子沒洗乾淨,有鹽 03/10 17:01
10F：→ FIREWAVE:殘留在夾子上造成的 03/10 17:03