作者mournermind (阿矇)
看板Biotech
標題我想請問關於跑蛋白電泳的問題
時間Sat Mar 8 14:48:12 2008
其實我想問得是關於SDS PAGE 或是western的問題
在我在實驗室過去的學習當中 學長姐教我們做蛋白的電泳時
都是強調要用幾伏特(V)的電壓去進行
但是在search了板上學長姐推薦的protocol online中的幾篇
和跑蛋白有關(SDS PAGE/Western)protocol
卻發現她們都是以電流(mA)作為單位 而很少提到電壓
請問這是怎樣的情況呢@@?
像我以往在跑SDS PAGE(13.5% running gel) 會用90V 200mA去跑
但我卻發現在跑的時候電流往往只能到20~30mA(室溫下跑而且越跑越低)
因此我開始懷疑實驗室的方法是不是那樣的準確?是否要用電流來定大小?
但是在那些protocol上卻又很少提到它們用的電壓是多少(大部分就只說用的電流 35mA
有的還會提示你說電壓100~200V) 其實我想試試看不一樣的方法
但是又怕把實驗室的東西弄爆~XD 是否有板室的學長姐可以幫我解惑一下
另外~像是我們實驗是在用semi dry時所用的電壓是25V 電流是400mA(常溫沒冷凝
鬼才知道電流到底有沒有辦法升那麼高)但我所看到的protocol都告訴我所用電流
大小是: 0.8mA/cm^2 所以一般大小的PAGE可能要的電流大小約是45mA
但是他卻沒說到那電壓要用多少@@?
好...其實總結一下我的問題..那就是."在跑這些蛋白的東西時重要的是電壓還是電流?"
我從我看到的那些protocol的角度看來似乎電流較重要
但是....我們實驗室的方法卻又是看電壓!(p.s我們實驗室除了2D以及濕式Western有
冷凝/cold room下做 其他像是SDS PAGE以及semi dry都是常溫下做~)
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◆ From: 140.113.55.220
1F：推 zoom8080:固定電流的話 跑膠隨著電阻越來越大 電壓會上升 直到你 03/08 16:52
2F：→ zoom8080:電源供應器瓦數的上限 固電電壓的話 電流會越來越小 03/08 16:53
3F：→ zoom8080:而越跑越慢 03/08 16:54
4F：推 CErline:而且定電壓越跑越慢，band會變成扇形… 03/08 17:11
5F：→ mournermind:喔喔所以說固定電壓比較安全@@?!! 03/09 00:32
6F：推 zoom8080:有冷卻系統的話 跑固定電流會比較漂亮~~~ 03/09 02:11
7F：推 dankai:我跑2D大部分都是固定電壓..因為是跑隔夜~隔天早上來剛好收 03/09 09:05
8F：推 thshf:我跑2D才會固定電流耶，不過是在有cooler的情況下... 03/13 13:20