作者mournermind (阿蒙)
看板Biotech
标题我想请问关於跑蛋白电泳的问题
时间Sat Mar 8 14:48:12 2008
其实我想问得是关於SDS PAGE 或是western的问题
在我在实验室过去的学习当中 学长姐教我们做蛋白的电泳时
都是强调要用几伏特(V)的电压去进行
但是在search了板上学长姐推荐的protocol online中的几篇
和跑蛋白有关(SDS PAGE/Western)protocol
却发现她们都是以电流(mA)作为单位 而很少提到电压
请问这是怎样的情况呢@@?
像我以往在跑SDS PAGE(13.5% running gel) 会用90V 200mA去跑
但我却发现在跑的时候电流往往只能到20~30mA(室温下跑而且越跑越低)
因此我开始怀疑实验室的方法是不是那样的准确?是否要用电流来定大小?
但是在那些protocol上却又很少提到它们用的电压是多少(大部分就只说用的电流 35mA
有的还会提示你说电压100~200V) 其实我想试试看不一样的方法
但是又怕把实验室的东西弄爆~XD 是否有板室的学长姐可以帮我解惑一下
另外~像是我们实验是在用semi dry时所用的电压是25V 电流是400mA(常温没冷凝
鬼才知道电流到底有没有办法升那麽高)但我所看到的protocol都告诉我所用电流
大小是: 0.8mA/cm^2 所以一般大小的PAGE可能要的电流大小约是45mA
但是他却没说到那电压要用多少@@?
好...其实总结一下我的问题..那就是."在跑这些蛋白的东西时重要的是电压还是电流?"
我从我看到的那些protocol的角度看来似乎电流较重要
但是....我们实验室的方法却又是看电压!(p.s我们实验室除了2D以及湿式Western有
冷凝/cold room下做 其他像是SDS PAGE以及semi dry都是常温下做~)
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◆ From: 140.113.55.220
1F：推 zoom8080:固定电流的话 跑胶随着电阻越来越大 电压会上升 直到你 03/08 16:52
2F：→ zoom8080:电源供应器瓦数的上限 固电电压的话 电流会越来越小 03/08 16:53
3F：→ zoom8080:而越跑越慢 03/08 16:54
4F：推 CErline:而且定电压越跑越慢，band会变成扇形… 03/08 17:11
5F：→ mournermind:喔喔所以说固定电压比较安全@@?!! 03/09 00:32
6F：推 zoom8080:有冷却系统的话 跑固定电流会比较漂亮~~~ 03/09 02:11
7F：推 dankai:我跑2D大部分都是固定电压..因为是跑隔夜~隔天早上来刚好收 03/09 09:05
8F：推 thshf:我跑2D才会固定电流耶，不过是在有cooler的情况下... 03/13 13:20