作者kakaman (日子過的真快阿)
看板Biotech
標題[求救]lysis buffer
時間Mon Mar 10 14:26:10 2008
之前打破細胞都用RIPA buffer
因為要做2D
所以lysis buffer改用8M Urea
4% CHAPS
用起來感覺心驚膽跳...
因為很難將細胞打散 細胞會連像成一大條透明鼻涕...
之後放在冷房的摩天輪上一個小時
再離心11500rpm 20min
會發生pellet離不太下來的情形...
想問問大家的經驗
另外想問的是wash buffer原本是使用PBS
但是因為它含有高鹽 我以我改用Tris-sucrose buffer
沒想到離心1500~4000rpm居然無法把細胞離下來
想請問大家做2D都用什麼當wash buffer
謝謝~~
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◆ From: 163.25.92.59
1F：推 aggaci:通常會黏黏的是因為Genomic DNA的關係，sonication即可解決 03/10 14:44
2F：推 kwanchi:黏黏會不會是因為 8m urea在4度c的關係? 03/11 16:37
3F：→ kwanchi:一般是收完CELL之後再沈澱 沈澱完再回溶在REHYDRATION BUF 03/11 16:38