作者sunspot438 (土地公爺爺~拜託你了!!)
看板Biotech
標題[求救] 請問有關vinculin細胞螢光染色
時間Tue Mar 11 02:02:49 2008
小弟目前正在趕一批細胞骨架螢光染色
主要要看actin與vinculin的變化
目前手上的染劑
vinculin (m)一抗是用abcam的
接invitrogen的二抗 Alexa 488-IgG(m)
actin以 Rhodamine-phalloidin
問題來了~目前雙染的結果
actin有出來(絲狀)OK!!
而vinculin照理說染出的結果應該在細胞的外圍或actin末端產生綠螢光點狀
BUT我染出來的總是整顆細胞都是綠的.....@#$%&#
一直不懂問題出在哪裡??
還請各位有染過vinculin的大大們幫我解惑一下~
拜託了~感嗯感恩!!
PS.我的大致步驟
Triton X100 0.1% RT 10min
BSA blocking 2% RT 1hr
1 Ab overnight 4C
2 Ab RT 1hr
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 59.104.57.34
1F：推 paua:請問抗體濃度? 03/11 10:10
2F：→ sunspot438:一抗1:400(abcam建議濃度) 二抗 1:200 03/11 10:36
3F：推 paua:會不會是沒洗乾淨呀? 03/11 12:05
4F：→ sunspot438:應該不會~我PBS wash至少5次 overnight也一樣 03/11 12:10
5F：推 oplz:可能 antibody 不能用 aldehyde fix 吧...... 03/12 02:09