作者sunspot438 (土地公爷爷~拜托你了!!)
看板Biotech
标题[求救] 请问有关vinculin细胞萤光染色
时间Tue Mar 11 02:02:49 2008
小弟目前正在赶一批细胞骨架萤光染色
主要要看actin与vinculin的变化
目前手上的染剂
vinculin (m)一抗是用abcam的
接invitrogen的二抗 Alexa 488-IgG(m)
actin以 Rhodamine-phalloidin
问题来了~目前双染的结果
actin有出来(丝状)OK!!
而vinculin照理说染出的结果应该在细胞的外围或actin末端产生绿萤光点状
BUT我染出来的总是整颗细胞都是绿的.....@#$%&#
一直不懂问题出在哪里??
还请各位有染过vinculin的大大们帮我解惑一下~
拜托了~感嗯感恩!!
PS.我的大致步骤
Triton X100 0.1% RT 10min
BSA blocking 2% RT 1hr
1 Ab overnight 4C
2 Ab RT 1hr
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 59.104.57.34
1F：推 paua:请问抗体浓度? 03/11 10:10
2F：→ sunspot438:一抗1:400(abcam建议浓度) 二抗 1:200 03/11 10:36
3F：推 paua:会不会是没洗乾净呀? 03/11 12:05
4F：→ sunspot438:应该不会~我PBS wash至少5次 overnight也一样 03/11 12:10
5F：推 oplz:可能 antibody 不能用 aldehyde fix 吧...... 03/12 02:09