作者rvnkhlnomgtl (或許天堂也常日落)
看板Biotech
標題[求救] 定序問題求救~~~~
時間Tue Mar 11 22:20:25 2008
最近忙著定序的工作
我們實驗室的習慣是,先PCR後跑電泳,再切下band送定序
但不知道為什麼,電泳圖明明顯示清楚的條帶,我也保證切膠的過程與保存沒有問題
但源資(定序公司)竟然送來的資料是全軍覆沒....讓我沒法接受
打電話去公司說請我再重送一下...但大家也都知道taq的消耗量很大
(總共有39管)
實在很不好意思拿著定序服務失敗的收據單給老闆簽名啊!!!!
所以想請問大家...電泳圖能拍得出來並切下該條帶的膠送定序沒法定序的情況是
有可能發生的嗎???
另外想請問大家都是給哪一家定序的呢?
明欣的風評如何呢?如果可以也順便給我報個價~~~謝謝~
--
遺憾提醒我們曾經幸福的可能
但 我們畢竟是錯過了!
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 203.187.34.118
1F：推 dankai:你們沒ligation之後那些步驟嗎~~~ 03/11 22:26
2F：→ dankai:我之前也像你們一樣直接從gel上切下band~再純化送定序! 03/11 22:27
3F：→ dankai:但出來的結果大多是雜訊太多....之後我都乖乖的做ligation 03/11 22:28
4F：推 oxoox:源資算挺不錯的公司了 比明欣好 怎麼不拿還在管子裡面的產物 03/11 22:28
5F：→ oxoox:送定序呢? 你是把所有產物都load進去了嗎 用管子裡的會好點 03/11 22:29
6F：→ rvnkhlnomgtl:不直接送PCR產物是因為還可透過電泳圖來確定有沒有BA 03/11 22:36
7F：→ rvnkhlnomgtl:band,會比較保險,而且之前做都沒出錯過,這次卻怪怪的 03/11 22:37
8F：推 sinwam:確認有沒有用該不用放很多產物去跑吧?? 03/11 22:54
9F：推 huangsw:我送都是附上電泳圖證明single band 回來就很漂亮了 03/11 23:26
10F：→ huangsw:除非你有double band 不然現在的生技公司似乎都收液態產物 03/11 23:26
11F：推 windkidll:可以給 PCR products 03/11 23:55
12F：→ rvnkhlnomgtl:我是Single band啊~且跟旁邊的marker比一樣清楚呢! 03/12 00:06
13F：→ rvnkhlnomgtl:所以我才會有點迷惑啊!不過很謝謝大家的意見 03/12 00:08
14F：推 vancent:確定primer沒問題? 03/12 01:01
15F：推 stephennext:PCR時有沒有用含有dye的buffer,有的話定序會有雜訊 03/12 01:39
16F：推 chvkimo:gel extraction loss量太大嗎 ? 我家的大約回收40%~50% 03/14 01:22