作者rvnkhlnomgtl (或许天堂也常日落)
看板Biotech
标题[求救] 定序问题求救~~~~
时间Tue Mar 11 22:20:25 2008
最近忙着定序的工作
我们实验室的习惯是,先PCR後跑电泳,再切下band送定序
但不知道为什麽,电泳图明明显示清楚的条带,我也保证切胶的过程与保存没有问题
但源资(定序公司)竟然送来的资料是全军覆没....让我没法接受
打电话去公司说请我再重送一下...但大家也都知道taq的消耗量很大
(总共有39管)
实在很不好意思拿着定序服务失败的收据单给老板签名啊!!!!
所以想请问大家...电泳图能拍得出来并切下该条带的胶送定序没法定序的情况是
有可能发生的吗???
另外想请问大家都是给哪一家定序的呢?
明欣的风评如何呢?如果可以也顺便给我报个价~~~谢谢~
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遗憾提醒我们曾经幸福的可能
但 我们毕竟是错过了!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 203.187.34.118
1F：推 dankai:你们没ligation之後那些步骤吗~~~ 03/11 22:26
2F：→ dankai:我之前也像你们一样直接从gel上切下band~再纯化送定序! 03/11 22:27
3F：→ dankai:但出来的结果大多是杂讯太多....之後我都乖乖的做ligation 03/11 22:28
4F：推 oxoox:源资算挺不错的公司了 比明欣好 怎麽不拿还在管子里面的产物 03/11 22:28
5F：→ oxoox:送定序呢? 你是把所有产物都load进去了吗 用管子里的会好点 03/11 22:29
6F：→ rvnkhlnomgtl:不直接送PCR产物是因为还可透过电泳图来确定有没有BA 03/11 22:36
7F：→ rvnkhlnomgtl:band,会比较保险,而且之前做都没出错过,这次却怪怪的 03/11 22:37
8F：推 sinwam:确认有没有用该不用放很多产物去跑吧?? 03/11 22:54
9F：推 huangsw:我送都是附上电泳图证明single band 回来就很漂亮了 03/11 23:26
10F：→ huangsw:除非你有double band 不然现在的生技公司似乎都收液态产物 03/11 23:26
11F：推 windkidll:可以给 PCR products 03/11 23:55
12F：→ rvnkhlnomgtl:我是Single band啊~且跟旁边的marker比一样清楚呢! 03/12 00:06
13F：→ rvnkhlnomgtl:所以我才会有点迷惑啊!不过很谢谢大家的意见 03/12 00:08
14F：推 vancent:确定primer没问题? 03/12 01:01
15F：推 stephennext:PCR时有没有用含有dye的buffer,有的话定序会有杂讯 03/12 01:39
16F：推 chvkimo:gel extraction loss量太大吗 ? 我家的大约回收40%~50% 03/14 01:22