作者rangelovero ( L'Arc~en~Ciel)
看板Biotech
標題Re: [求救] 定序問題求救~~~~
時間Tue Mar 11 23:14:00 2008
※ 引述《rvnkhlnomgtl (或許天堂也常日落)》之銘言：
: 最近忙著定序的工作
: 我們實驗室的習慣是,先PCR後跑電泳,再切下band送定序
: 但不知道為什麼,電泳圖明明顯示清楚的條帶,我也保證切膠的過程與保存沒有問題
: 但源資(定序公司)竟然送來的資料是全軍覆沒....讓我沒法接受
: 打電話去公司說請我再重送一下...但大家也都知道taq的消耗量很大
: (總共有39管)
: 實在很不好意思拿著定序服務失敗的收據單給老闆簽名啊!!!!
: 所以想請問大家...電泳圖能拍得出來並切下該條帶的膠送定序沒法定序的情況是
: 有可能發生的嗎???
: 另外想請問大家都是給哪一家定序的呢?
: 明欣的風評如何呢?如果可以也順便給我報個價~~~謝謝~
我之前有過類似經驗
PCR產物有兩三條BAND(當中包含我的目標大小)
所以很自然地就挖膠純化所要的片段
接著再進行TA CLONING→定序
不過不管作幾次就是無法 TA 成功 (平常 TA cloning 是很基本的工作)
於是退而求其次 直接將純化完的產物送定序
也就是跟你一樣的步驟 結果也跟你一樣 一堆雜訊 = =+
業務跟我說不要純化了 直接給他 PCR 產物
(他說以他們的經驗來看 PCR 產物會比較好定)
雖然不相信 但也沒別的辦法了XD
結果還真的定出來囉
當然我不是建議你送 PCR 產物
只是想說如果純粹要確定是否有放出正確產物
那應該還有其他條路可走(像上面說的)
不過TA cloning 是最保險也最易定成功的方法
你也許可以試試！
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◆ From: 59.104.133.141
※ 編輯: rangelovero 來自: 59.104.133.141 (03/11 23:15)
1F：推 rvnkhlnomgtl:業務是有跟我提過若產物的量是50ul,可以LOAD10ul看有 03/12 00:12
2F：→ rvnkhlnomgtl:沒有條帶,若確定有再送剩下的PCR產物~ 03/12 00:13
3F：→ rvnkhlnomgtl:不過我只是有點疑惑為什麼只有SINGLE BAND且清晰為什 03/12 00:14
4F：→ rvnkhlnomgtl:失敗???不過很謝謝你的意見哦~Y 03/12 00:14