作者rangelovero ( L'Arc~en~Ciel)
看板Biotech
标题Re: [求救] 定序问题求救~~~~
时间Tue Mar 11 23:14:00 2008
※ 引述《rvnkhlnomgtl (或许天堂也常日落)》之铭言：
: 最近忙着定序的工作
: 我们实验室的习惯是,先PCR後跑电泳,再切下band送定序
: 但不知道为什麽,电泳图明明显示清楚的条带,我也保证切胶的过程与保存没有问题
: 但源资(定序公司)竟然送来的资料是全军覆没....让我没法接受
: 打电话去公司说请我再重送一下...但大家也都知道taq的消耗量很大
: (总共有39管)
: 实在很不好意思拿着定序服务失败的收据单给老板签名啊!!!!
: 所以想请问大家...电泳图能拍得出来并切下该条带的胶送定序没法定序的情况是
: 有可能发生的吗???
: 另外想请问大家都是给哪一家定序的呢?
: 明欣的风评如何呢?如果可以也顺便给我报个价~~~谢谢~
我之前有过类似经验
PCR产物有两三条BAND(当中包含我的目标大小)
所以很自然地就挖胶纯化所要的片段
接着再进行TA CLONING→定序
不过不管作几次就是无法 TA 成功 (平常 TA cloning 是很基本的工作)
於是退而求其次 直接将纯化完的产物送定序
也就是跟你一样的步骤 结果也跟你一样 一堆杂讯 = =+
业务跟我说不要纯化了 直接给他 PCR 产物
(他说以他们的经验来看 PCR 产物会比较好定)
虽然不相信 但也没别的办法了XD
结果还真的定出来罗
当然我不是建议你送 PCR 产物
只是想说如果纯粹要确定是否有放出正确产物
那应该还有其他条路可走(像上面说的)
不过TA cloning 是最保险也最易定成功的方法
你也许可以试试！
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 59.104.133.141
※ 编辑: rangelovero 来自: 59.104.133.141 (03/11 23:15)
1F：推 rvnkhlnomgtl:业务是有跟我提过若产物的量是50ul,可以LOAD10ul看有 03/12 00:12
2F：→ rvnkhlnomgtl:没有条带,若确定有再送剩下的PCR产物~ 03/12 00:13
3F：→ rvnkhlnomgtl:不过我只是有点疑惑为什麽只有SINGLE BAND且清晰为什 03/12 00:14
4F：→ rvnkhlnomgtl:失败???不过很谢谢你的意见哦~Y 03/12 00:14