作者hongdow (紅豆)
看板Biotech
標題[求救]想請教大家一個令我不解的現象..
時間Thu Mar 13 15:43:52 2008
大家應該對使用BCA kit去與含有細胞蛋白質的 lysis buffer中反應
最後由ELISA測定OD值....在定量出蛋白質的量
如果我敘述沒錯的話流程大概是這樣吧^^
而再96well中注入BCA kit 和 含有蛋白質buffer的同時
大家應該都會多注入要當做blank的BCA kit 和 不含蛋白質的lysis buffer
以作為將來要扣掉的標準
但問題來了...
在我使用lysis buffer萃取細胞蛋白質後...
依然按照上述步驟, 空白也加了,預測物也加了, BCA kit也加了
反應一段時間後...用ELISA測OD值....發現扣掉空白後是負值...> <
怎麼想都沒道理...
就算都沒沒萃取到蛋白質.....頂多是0吧....怎麼會是負的勒....
真的不解...到底哪裡錯了.......拜託各位幫我解惑....
非常謝謝你看到最後一行.....非常謝謝囉^^
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.118.6.103
1F：推 K587262:用ELISA的話 沒有蛋白未必是0 有可能是負值的 03/13 16:13
2F：→ hongdow:那怎麼處理這種數據阿...沒有意義了嗎.> <" 03/13 16:18
3F：推 CErline:因為你的buffer和BCA會起作用… 03/13 17:05
4F：→ CErline:改用超音波或用破菌機，不加lysis buffer看看吧 03/13 17:06
5F：推 K587262:沒抽到蛋白質應該是個大問題 注意protocol跟試劑吧 03/13 18:58
6F：→ hongdow:其實在細胞數目約20萬以上才測的到ㄟ.在少的話就變成負的 03/13 19:03
7F：→ hongdow:步是完全抽不到 03/13 19:05
8F：→ hongdow:我buffer的成分是tris-HCL50mM,tritonX-100 1%,EDTA 0.5mM 03/13 21:58
9F：→ hongdow:NaCl 150mM....哪裡不對勁嗎?? 03/13 22:02
10F：推 limyeeshin:據我老闆說BCA可以tolerate detergent,應該沒問題才對 03/13 23:28
11F：推 chvkimo:我來說說除了試劑以外的原因 1.你的microplate不乾淨 03/14 01:41
12F：→ chvkimo:2.讀值時 溶液有氣泡 不過我想 這些你應該都有注意到 03/14 01:42
13F：推 yalinn:你的OD值有沒有弄錯阿?? 03/17 18:43