作者hongdow (红豆)
看板Biotech
标题[求救]想请教大家一个令我不解的现象..
时间Thu Mar 13 15:43:52 2008
大家应该对使用BCA kit去与含有细胞蛋白质的 lysis buffer中反应
最後由ELISA测定OD值....在定量出蛋白质的量
如果我叙述没错的话流程大概是这样吧^^
而再96well中注入BCA kit 和 含有蛋白质buffer的同时
大家应该都会多注入要当做blank的BCA kit 和 不含蛋白质的lysis buffer
以作为将来要扣掉的标准
但问题来了...
在我使用lysis buffer萃取细胞蛋白质後...
依然按照上述步骤, 空白也加了,预测物也加了, BCA kit也加了
反应一段时间後...用ELISA测OD值....发现扣掉空白後是负值...> <
怎麽想都没道理...
就算都没没萃取到蛋白质.....顶多是0吧....怎麽会是负的勒....
真的不解...到底哪里错了.......拜托各位帮我解惑....
非常谢谢你看到最後一行.....非常谢谢罗^^
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.118.6.103
1F：推 K587262:用ELISA的话 没有蛋白未必是0 有可能是负值的 03/13 16:13
2F：→ hongdow:那怎麽处理这种数据阿...没有意义了吗.> <" 03/13 16:18
3F：推 CErline:因为你的buffer和BCA会起作用… 03/13 17:05
4F：→ CErline:改用超音波或用破菌机，不加lysis buffer看看吧 03/13 17:06
5F：推 K587262:没抽到蛋白质应该是个大问题 注意protocol跟试剂吧 03/13 18:58
6F：→ hongdow:其实在细胞数目约20万以上才测的到ㄟ.在少的话就变成负的 03/13 19:03
7F：→ hongdow:步是完全抽不到 03/13 19:05
8F：→ hongdow:我buffer的成分是tris-HCL50mM,tritonX-100 1%,EDTA 0.5mM 03/13 21:58
9F：→ hongdow:NaCl 150mM....哪里不对劲吗?? 03/13 22:02
10F：推 limyeeshin:据我老板说BCA可以tolerate detergent,应该没问题才对 03/13 23:28
11F：推 chvkimo:我来说说除了试剂以外的原因 1.你的microplate不乾净 03/14 01:41
12F：→ chvkimo:2.读值时 溶液有气泡 不过我想 这些你应该都有注意到 03/14 01:42
13F：推 yalinn:你的OD值有没有弄错阿?? 03/17 18:43