作者lblackpig (小黑豬)
看板Biotech
標題[求救] cloning遇到問題！
時間Sat Mar 15 00:19:15 2008
為了clone一個大約1.6K的gene，設計primer進行PCR想把full length片段給P出來，結果不管怎麼P都沒有任何band。因為是full length，也沒有辦法把primer換個地方設計，請問大大們，有沒有一些建議？
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◆ From: 122.123.138.160
1F：推 alaric:我最近也是遇到這種問題, 早知原因是不同物種, 所以p不出 03/15 00:30
2F：→ alaric:如果物種是對的, 試著降低anneal溫度, P看看.. 03/15 00:32
3F：→ bluecsky:我想你應該去查一下序列正確性問題..1.6k不算太大 03/15 07:48
4F：→ bluecsky:一般的PCR大多都做的出來..要是primer沒錯 03/15 07:49
5F：→ bluecsky:就試試看做gradient的溫度去找條件吧 03/15 07:50
6F：推 dankai:你可以試試看菌是不是出問題了~所以轉型效果變差! 03/15 10:32
7F：→ dankai:我們實驗室最近有一批菌因為冰箱關係..導致長的出菌~卻沒接 03/15 10:33
8F：→ dankai:到任何東西~~~ 03/15 10:34
9F：→ lblackpig:物種是人類沒錯，溫度已降到五十五度，但仍沒有任何band 03/15 15:04
10F：推 wangba:試試換cDNA library 基因不見得有表現 03/15 19:33
11F：→ lblackpig:用了很貴的taq，溫度降到五十度，終於跑出來了，謝謝！ 03/15 19:54