作者lblackpig (小黑猪)
看板Biotech
标题[求救] cloning遇到问题！
时间Sat Mar 15 00:19:15 2008
为了clone一个大约1.6K的gene，设计primer进行PCR想把full length片段给P出来，结果不管怎麽P都没有任何band。因为是full length，也没有办法把primer换个地方设计，请问大大们，有没有一些建议？
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 122.123.138.160
1F：推 alaric:我最近也是遇到这种问题, 早知原因是不同物种, 所以p不出 03/15 00:30
2F：→ alaric:如果物种是对的, 试着降低anneal温度, P看看.. 03/15 00:32
3F：→ bluecsky:我想你应该去查一下序列正确性问题..1.6k不算太大 03/15 07:48
4F：→ bluecsky:一般的PCR大多都做的出来..要是primer没错 03/15 07:49
5F：→ bluecsky:就试试看做gradient的温度去找条件吧 03/15 07:50
6F：推 dankai:你可以试试看菌是不是出问题了~所以转型效果变差! 03/15 10:32
7F：→ dankai:我们实验室最近有一批菌因为冰箱关系..导致长的出菌~却没接 03/15 10:33
8F：→ dankai:到任何东西~~~ 03/15 10:34
9F：→ lblackpig:物种是人类没错，温度已降到五十五度，但仍没有任何band 03/15 15:04
10F：推 wangba:试试换cDNA library 基因不见得有表现 03/15 19:33
11F：→ lblackpig:用了很贵的taq，温度降到五十度，终於跑出来了，谢谢！ 03/15 19:54