作者percussionHA (在雲朵上失足 )
看板Biotech
標題[求救] gelatin zymography的處理法
時間Mon Mar 24 16:26:36 2008
想請問各位
有沒有人做過這個實驗
由於老師叫我試做 做了幾次
發覺sample的處理遇到問題
查了paper說是要用condition medium(即serum free)收取
意思是指收上青液 還是底盤的細胞也要依並收下呢
那底盤的細胞 是利用ripa buffer還是其他呢?
就再這個點一值卡關
跑了兩次膠
都沒有出現ＣＬＥＡＲ ＢＡＮＤ
想請問問題為何？
謝謝阿
--
ｏ ｏ》 ｏ ｏ ｏ 《ｏ ｏ
ꈠ |┼┘ ＜∕ ＜｜＞ 〈Ｔ〉 ＜｜＞ ﹨＞ └┼┘
＜＼ ／＞ 〈 〉 ∕﹨ 〈 〉 ＜＼ ／＞
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.122.194.181
1F：推 sharkcell:不收細胞只收medium跑PAGE?看哪邊的蛋白質啊？ 03/24 16:33
2F：推 monkeycute:我沒有用serum free的medium也跑得出clear band耶 03/24 16:41
3F：→ percussionHA:所以我想請問底盤細胞應該如何處理？ 03/24 16:41
4F：→ monkeycute:不收細胞 只收medium 03/24 16:41
5F：推 Alannieh:取適量不還DTT BME的LOADING DYE混合MEDIUM電泳 03/24 21:59
6F：推 cytospin:10%FBS/RPMIonly也可以跑的出band 03/25 07:40
7F：→ cytospin:我想你的問題應該是con不夠 我之前懸浮細胞2x10^6/ml養ꐠ 03/25 07:40
8F：→ cytospin:24小時後load 30 ul 上青液, MMP是release protein 03/25 07:42
9F：→ cytospin:記得要有positive control證明你的zymogrphy work喔 03/25 07:42
10F：→ cytospin:我用的serum free medium是stemline 沒有background 03/25 07:43
11F：→ percussionHA:謝謝各位阿 我這週會再試做一次 03/25 10:20