作者percussionHA (在云朵上失足 )
看板Biotech
标题[求救] gelatin zymography的处理法
时间Mon Mar 24 16:26:36 2008
想请问各位
有没有人做过这个实验
由於老师叫我试做 做了几次
发觉sample的处理遇到问题
查了paper说是要用condition medium(即serum free)收取
意思是指收上青液 还是底盘的细胞也要依并收下呢
那底盘的细胞 是利用ripa buffer还是其他呢?
就再这个点一值卡关
跑了两次胶
都没有出现ＣＬＥＡＲ ＢＡＮＤ
想请问问题为何？
谢谢阿
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◆ From: 140.122.194.181
1F：推 sharkcell:不收细胞只收medium跑PAGE?看哪边的蛋白质啊？ 03/24 16:33
2F：推 monkeycute:我没有用serum free的medium也跑得出clear band耶 03/24 16:41
3F：→ percussionHA:所以我想请问底盘细胞应该如何处理？ 03/24 16:41
4F：→ monkeycute:不收细胞 只收medium 03/24 16:41
5F：推 Alannieh:取适量不还DTT BME的LOADING DYE混合MEDIUM电泳 03/24 21:59
6F：推 cytospin:10%FBS/RPMIonly也可以跑的出band 03/25 07:40
7F：→ cytospin:我想你的问题应该是con不够 我之前悬浮细胞2x10^6/ml养ꐠ 03/25 07:40
8F：→ cytospin:24小时後load 30 ul 上青液, MMP是release protein 03/25 07:42
9F：→ cytospin:记得要有positive control证明你的zymogrphy work喔 03/25 07:42
10F：→ cytospin:我用的serum free medium是stemline 没有background 03/25 07:43
11F：→ percussionHA:谢谢各位阿 我这周会再试做一次 03/25 10:20