作者pungo (史信)
看板Biotech
標題[討論] blunt-end ligation
時間Wed Mar 26 23:37:16 2008
請問一下
PFU做出的PCR product
可以直接拿來做blunt-end ligation嗎?
還有blunt-end ligation有啥需特別注意的地方?
真難做...
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 203.118.230.16
1F：推 blence:雖然理論上可行,但是vector在CIP之後實際上是沒辦法成功的 03/26 23:48
2F：→ blence:除非5端加P,或者vector不要CIP但這成功率比發票難中更多 03/26 23:50
3F：→ pungo:我vector有用CIP 接不起來..之後打算用taq做PCR來接看看 03/26 23:57
4F：推 ROKEE:絕對可以，我用過Pfu和EcoRV切一刀的vector接，做成不下十次 03/27 10:23
5F：推 ROKEE:從0.4~12kb的片段都有塞進2.1kb載體的記錄過(搭配藍白) 03/27 10:27
6F：推 blence:一般的primer的5端沒有P,如果vector又CIP去P,沒磷酸怎麼接? 03/27 10:43
7F：推 ROKEE:那我怎麼接出來的@@ (不然就不要CIP好了) 03/27 10:50
8F：推 littleable:PCR產物還要用T4 PNK加上P才能接進去吧 03/28 17:56