作者pungo (史信)
看板Biotech
标题[讨论] blunt-end ligation
时间Wed Mar 26 23:37:16 2008
请问一下
PFU做出的PCR product
可以直接拿来做blunt-end ligation吗?
还有blunt-end ligation有啥需特别注意的地方?
真难做...
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 203.118.230.16
1F：推 blence:虽然理论上可行,但是vector在CIP之後实际上是没办法成功的 03/26 23:48
2F：→ blence:除非5端加P,或者vector不要CIP但这成功率比发票难中更多 03/26 23:50
3F：→ pungo:我vector有用CIP 接不起来..之後打算用taq做PCR来接看看 03/26 23:57
4F：推 ROKEE:绝对可以，我用过Pfu和EcoRV切一刀的vector接，做成不下十次 03/27 10:23
5F：推 ROKEE:从0.4~12kb的片段都有塞进2.1kb载体的记录过(搭配蓝白) 03/27 10:27
6F：推 blence:一般的primer的5端没有P,如果vector又CIP去P,没磷酸怎麽接? 03/27 10:43
7F：推 ROKEE:那我怎麽接出来的@@ (不然就不要CIP好了) 03/27 10:50
8F：推 littleable:PCR产物还要用T4 PNK加上P才能接进去吧 03/28 17:56