作者hjhao (BIO)
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標題Re: [求救] 請問SDS的tris buffer為什麼會不好滴定？
時間Sat Mar 29 22:29:23 2008
※ 引述《LIAR (墮天使)》之銘言：
: western有很多buffer，我的老師（別的實驗室）要求他的學生所有buffer自己配，
: 連老師自己也是自己配，所以我也是自己google後自己配，不過光只有tris的話還
: 好，用HCl滴定沒問題。
: 但只要有加SDS，pH meter就變得很不敏感，雖然有攪拌，但明明滴了不少HCl，
: 但pH meter卻沒變化，把pH meter拿起來重新用dd H2O水沖過再重測才會看到變化，
: 而且很快又會定住，所以一直定不準。
: 老師說tris直接定好再加SDS也可以，不過我想說最後pH比較準，而且加一堆東西後
: 會不會改變pH也不曉得，我的配方也是最後才加一句
: "check the pH and bring it to pH 6.8"
: 所以想請問有人滴定過含SDS的buffer遇過我這種問題嗎？請問怎麼解決呢？
我猜測你應該是配SDS-PAGE running buffer,
這個步驟建議按照配方將各藥品按照配方配置溶解而不要調整PH值,
通常這時候的PH值應該在8.3附近,
這時候加HCL會改變離子強度, 本來應該1hr結束的可能就提前結束.
如果是配上層的pH6.8或下層的pH8.8 Tris buffer,
請不用加SDS去調整,
如果看配方, 通常都是個別泡好, 配膠時才混在一起,
如果是廠商提供的premixed buffer, 也會發現Tris buffer 與SDS是分開提供.
我想可能就是有這樣的因素在吧?
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 59.104.99.155
1F：推 LIAR:其實sample buffer也有，因為SDS一開始配12%，so.... 03/30 17:22
2F：推 LIAR:running buffer確實各家都很接近，但其他就差很多了。 03/30 17:41
3F：推 momyourb:配pH 6.8用tris acid, 配pH 8.8用tris base, 我實驗室的 03/30 21:34
4F：→ momyourb:的配法，參考看看(至於哪家有賣，可能要問一下) 03/30 21:35