作者hjhao (BIO)
看板Biotech
标题Re: [求救] 请问SDS的tris buffer为什麽会不好滴定？
时间Sat Mar 29 22:29:23 2008
※ 引述《LIAR (堕天使)》之铭言：
: western有很多buffer，我的老师（别的实验室）要求他的学生所有buffer自己配，
: 连老师自己也是自己配，所以我也是自己google後自己配，不过光只有tris的话还
: 好，用HCl滴定没问题。
: 但只要有加SDS，pH meter就变得很不敏感，虽然有搅拌，但明明滴了不少HCl，
: 但pH meter却没变化，把pH meter拿起来重新用dd H2O水冲过再重测才会看到变化，
: 而且很快又会定住，所以一直定不准。
: 老师说tris直接定好再加SDS也可以，不过我想说最後pH比较准，而且加一堆东西後
: 会不会改变pH也不晓得，我的配方也是最後才加一句
: "check the pH and bring it to pH 6.8"
: 所以想请问有人滴定过含SDS的buffer遇过我这种问题吗？请问怎麽解决呢？
我猜测你应该是配SDS-PAGE running buffer,
这个步骤建议按照配方将各药品按照配方配置溶解而不要调整PH值,
通常这时候的PH值应该在8.3附近,
这时候加HCL会改变离子强度, 本来应该1hr结束的可能就提前结束.
如果是配上层的pH6.8或下层的pH8.8 Tris buffer,
请不用加SDS去调整,
如果看配方, 通常都是个别泡好, 配胶时才混在一起,
如果是厂商提供的premixed buffer, 也会发现Tris buffer 与SDS是分开提供.
我想可能就是有这样的因素在吧?
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◆ From: 59.104.99.155
1F：推 LIAR:其实sample buffer也有，因为SDS一开始配12%，so.... 03/30 17:22
2F：推 LIAR:running buffer确实各家都很接近，但其他就差很多了。 03/30 17:41
3F：推 momyourb:配pH 6.8用tris acid, 配pH 8.8用tris base, 我实验室的 03/30 21:34
4F：→ momyourb:的配法，参考看看(至於哪家有卖，可能要问一下) 03/30 21:35