作者Daphnia (Daphnia)
看板Biotech
標題[求救]beta actin壓出來控制組跟誘導組差很多？
時間Mon Dec 10 16:04:02 2012
用幽門螺旋桿菌誘導MKN45 24h
用細胞括勺收細胞(含菌)離心去除上清液用lysis buffer(promega biotech)破細胞
用BRAFORD定量蛋白
用8%的膠 轉漬的膜是用ＰＶＤＦ膜
用的抗體是聖誕老人的
https://www.dropbox.com/s/txah7f03rjap317/Bactin.pdf
最右邊的是沒有家菌的左邊的四個是幽門螺旋桿菌處理的
這到底是怎麼會是啦！！！拜託各位幫我想想是怎麼回事
我有想是不是我的菌讓我的細胞死掉很多或著是加了菌,菌的蛋白影響定量
這總實驗誘導的方式滿多ＰＡＰＥＲ都有用類似的方式但他們壓出來很像都沒有
類似的問題！！！
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◆ From: 140.120.104.158
※ 編輯: Daphnia 來自: 140.120.104.158 (12/10 16:06)
※ TW185930:轉錄至看板 Biology 12/10 16:58
1F：→ williamyang:換alpha tubulin,GAPDH,或是histone之類的試試看? 12/10 19:53
2F：推 chench0710:私以為是HP菌的的蛋白質也被定量進去了 12/10 20:31
3F：→ chench0710:也因此human actin的比例也被壓低惹 12/10 20:32
4F：推 chench0710:如果要證實的話可以去壓壓看HP菌的protein XD 12/10 20:35
5F：→ Daphnia:控制組在誘導完破細胞時會加等量的hp一起收但壓出來一樣 12/10 22:27
6F：→ Daphnia:想知道我用的lysis buffer會不會也收到菌的蛋白！？ 12/10 22:29
7F：推 chench0710:誘導的這段時間HP可能也會長,不知道有沒有考慮進去? 12/10 23:06
8F：→ Daphnia:後來加進去的hp在同一個六孔盤培養所以會長應該差不多 12/11 01:39
9F：推 chench0710:若是細胞有死很多的話可以試試看在離心完之後 12/11 09:57
10F：→ chench0710:用冰的PBS去把它打散在離心一次之後再破細胞... 12/11 09:58
11F：→ chench0710:因為medium裡面本身也有protein(from FBS)如果細胞真的 12/11 09:59
12F：→ chench0710:死很多的時候就會被這個影響~"~但我覺得應該不是就對了 12/11 10:00
13F：推 chench0710:還是說定量的時候出問題?控制組濃度不小心爆表了= =? 12/11 10:05
14F：→ Daphnia:感謝！以上方法我試試看 12/11 10:44