作者Daphnia (Daphnia)
看板Biotech
标题[求救]beta actin压出来控制组跟诱导组差很多？
时间Mon Dec 10 16:04:02 2012
用幽门螺旋杆菌诱导MKN45 24h
用细胞括勺收细胞(含菌)离心去除上清液用lysis buffer(promega biotech)破细胞
用BRAFORD定量蛋白
用8%的胶 转渍的膜是用ＰＶＤＦ膜
用的抗体是圣诞老人的
https://www.dropbox.com/s/txah7f03rjap317/Bactin.pdf
最右边的是没有家菌的左边的四个是幽门螺旋杆菌处理的
这到底是怎麽会是啦！！！拜托各位帮我想想是怎麽回事
我有想是不是我的菌让我的细胞死掉很多或着是加了菌,菌的蛋白影响定量
这总实验诱导的方式满多ＰＡＰＥＲ都有用类似的方式但他们压出来很像都没有
类似的问题！！！
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◆ From: 140.120.104.158
※ 编辑: Daphnia 来自: 140.120.104.158 (12/10 16:06)
※ TW185930:转录至看板 Biology 12/10 16:58
1F：→ williamyang:换alpha tubulin,GAPDH,或是histone之类的试试看? 12/10 19:53
2F：推 chench0710:私以为是HP菌的的蛋白质也被定量进去了 12/10 20:31
3F：→ chench0710:也因此human actin的比例也被压低惹 12/10 20:32
4F：推 chench0710:如果要证实的话可以去压压看HP菌的protein XD 12/10 20:35
5F：→ Daphnia:控制组在诱导完破细胞时会加等量的hp一起收但压出来一样 12/10 22:27
6F：→ Daphnia:想知道我用的lysis buffer会不会也收到菌的蛋白！？ 12/10 22:29
7F：推 chench0710:诱导的这段时间HP可能也会长,不知道有没有考虑进去? 12/10 23:06
8F：→ Daphnia:後来加进去的hp在同一个六孔盘培养所以会长应该差不多 12/11 01:39
9F：推 chench0710:若是细胞有死很多的话可以试试看在离心完之後 12/11 09:57
10F：→ chench0710:用冰的PBS去把它打散在离心一次之後再破细胞... 12/11 09:58
11F：→ chench0710:因为medium里面本身也有protein(from FBS)如果细胞真的 12/11 09:59
12F：→ chench0710:死很多的时候就会被这个影响~"~但我觉得应该不是就对了 12/11 10:00
13F：推 chench0710:还是说定量的时候出问题?控制组浓度不小心爆表了= =? 12/11 10:05
14F：→ Daphnia:感谢！以上方法我试试看 12/11 10:44