感謝大家的幫忙 終於有分離出來了>< 關鍵應該就是在於我的packing液和elute液極性改變太大吧 一但產生龜裂 就會使Gel下沉 並且堆積的樣子 所以我的第一個compound會堆在洞口 第二個compound會逼近 然後壓力累積到一個程度(?) Gel會一次流出來 這時候 第一個和第二個已經mix了 就會失敗 這是我的心得 給大家參考一下 ※ 引述《lunarblue (green52*死智障)》之銘言： : ※ 引述《kentai (為什麼沒有愛 在我們之間)》之銘言： : : 我還是沒做出來>< 可恨阿 : : 不論如何都得不到一個點的管>< : : 我把我的步驟寫一下 看大家看一下有什麼錯誤 : 很多的部分前面的版友都講過了.. : 我也是建議你請人帶你做一次吧... : 看起來閣下應該沒啥流column的經驗 : : 東西有三個點 剪一片約六公分的TLC 用純EA去跑 : 一般少用單一溶劑去流管柱 : : 距離上端0.5cm有一個點 再間隔1cm有第二點(產物) 再間隔1cm有第三點 : : 感覺是分的很開 : Rf值太高了.. : 這樣你EA一灌下去,Rf值0.5跟0.8的點老實說沒啥分離到... : 請將主要的點調在Rf＝0.3左右,也就是說請換沖提液的極性.. : 用hexane/EA這個系統是比較普遍的選擇.. : : 準備Packing Gel 用的是silica gel 使用的column是250ml 直徑大概5cm吧 : : 用Hexane packing ,Gel大概有20cm高，加壓1次10分鐘 做5次 : 如果你真的覺得那麼難分,可以用濕填的,效果會比較好（不過你的應該不至於難分） : : load大概有3cm ，等到跑到乳化面的時候，慢慢加入EA 開始跑 : loading太高,一般請在1公分左右.. : 請換大一點的管柱不然就分兩次流吧 : 你極性就已經那麼高了,還loading那麼厚一層,這樣當然很容易mix在一起 : : 用12x75mm的試管去接 20管左右有第1點 23~26有兩點 27~點消失約80管 有三點 : : 所以我大部分的產物都混在三點裡面 好痛苦阿>< : : 另外 Gel常常跑了卻產生龜裂的現象 明明沒乾 不知道為什麼@@ : 因為沖提液極性變太快了 : 基本上你packing時就可以用hexane/EA（Rf＝0.3左右）的系統去packing了 : 然後流的時候就不用換沖提液了,自然也就不會龜裂了 : 如果你真的覺得後面出來的點太慢了,可以慢慢提高沖提液極性將後面的衝出來 : 當然前提是你前面的點已經出來了 : 如果是大量的而且又如你所說點與點之間分隔得很遠的話 : 那其實用一下簡單的flash column也可以快速得到不錯的分離效果 : : 不知道大家有什麼意見>< Thx! --

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